Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
개골이 노출된 마취된 마우스를 정위 고정 프레임에 고정합니다.
뇌의 말단 줄무늬 침대 핵(BNST)에는 빛에 민감한 양이온 채널을 발현하는 바이러스 형질도입 뉴런이 포함되어 있습니다.
두개골에 구멍을 뚫고 광섬유를 삽입한 다음 지지 나사와 치과용 시멘트로 고정합니다.
추가 구멍을 뚫어 뇌파 검사(EEG) 및 근전도 검사(EMG) 전극이 포함된 어셈블리를 배치하고 접착제로 고정합니다.
목 근육을 노출시켜 EMG 전극선을 삽입한 다음 회복을 허용합니다.
마우스를 녹음 시스템에 연결하고 실험실에 놓고 절전 모드로 둡니다.
광섬유를 통해 빛을 전달하여 빛에 민감한 양이온 채널을 활성화하고 활동 전위를 생성하는 양이온 유입을 유발합니다.
신호는 수면 조절 영역으로 전파되어 각성을 촉진합니다.
뇌 활동을 모니터링하기 위해 EEG 신호를 기록하고 근육 활동을 감지하기 위해 EMG 신호를 기록하여 수면에서 각성으로의 전환을 관찰합니다.
뇌파도(EEG) 및 근전도(EMG) 전극 이식의 경우 먼저 양쪽 끝에서 1mm의 절연체가 벗겨진 두 개의 스테인리스 스틸 와이어를 EMG 전극에 납땜하고 전극의 중심을 브레그마에 놓습니다. 그런 다음 각 EEG 전극의 위치를 표시합니다.
광섬유 임플란트의 위치를 결정하려면 광섬유 페룰을 매니퓰레이터에 부착하고 매니퓰레이터 암을 수평선에 대해 ±30도 각도로 회전시킵니다. 섬유 끝을 브레그마에 놓고 좌표를 기록합니다. 팁을 대상 삽입선으로 이동하고 두개골의 위치와 삽입 부위 옆의 앵커 나사 위치를 표시합니다.
치과용 드릴을 사용하여 각 부위의 두개골을 뚫고 매니퓰레이터를 사용하여 BNST 위에 도달할 때까지 광섬유를 부드럽게 삽입합니다. 페룰은 나머지 두개골 위에 놓여야 합니다. 경막이 부러지거나 조직이 손상되지 않도록 주의하면서 앵커 나사로 섬유를 두개골에 고정합니다.
그런 다음 광경화성 치과용 시멘트로 섬유와 나사를 덮습니다. 다음으로 EEG/EMG 전극용 구멍을 뚫고 첫 번째 전극의 끝을 하나의 구멍에 삽입합니다. 한 손으로 임플란트를 잡고 두개골과 전극 사이의 공간에 시아노아크릴레이트 접착제를 바르고 조직이 손상되지 않도록 주의하면서 나머지 부분까지 전극을 삽입합니다.
모든 전극이 배치되면 전극과 광섬유의 둘레를 추가 시아노아크릴레이트 접착제와 시아노아크릴레이트 촉진제로 덮어 페룰에서 광케이블 및 전극에서 리드선 연결 영역에 방해가 되지 않도록 합니다. 이제 목 근육을 노출시키고 근육 아래에 EMG 전극용 와이어를 삽입합니다. EMG 전극의 길이를 조정하여 목덜미 근육 바로 아래에 맞도록 하고 임플란트에 더 많은 시아노아크릴레이트 접착제와 촉진제를 채웁니다.
그런 다음 완전한 보상이 될 때까지 모니터링이 있는 열 패드에 마우스를 놓습니다. 표적 뉴런의 광 여기 중 EEG/EMG 모니터링의 경우 먼저 스칼라를 사용하여 레이저 강도를 조정하고 페룰을 사용하여 레이저 케이블의 끝을 사용하지 않는 광섬유에 묶습니다. 광섬유와 케이블 사이의 접합부에 공간이 없는지 확인합니다.
20분 후 예열된 레이저를 강도 검사기로 방출하고 강도를 10밀리와트/밀리미터제곱미터로 조정합니다. 빛 펄스 지속 시간을 10밀리초로, 휴식 기간을 40밀리초로, 주기를 20으로, 반복을 20으로 설정합니다. 레이저 모드를 트랜지스터 로직으로 변경하고 패턴 레귤레이터에 의해 제어되는 광섬유에서 광 펄스가 방출되는지 확인합니다.
이식된 전극과 케이블 어댑터를 연결한 다음 접합부를 불투과성 재료로 덮어 레이저 누출을 방지합니다. 그리고 레이저가 준비되면 EEG/EMG 기록을 위해 마우스를 실험실로 옮깁니다. 비빠른 안구 운동 또는 빠른 안구 운동 수면으로 인한 각성 잠복기를 평가하려면 기록 시간과 최적화된 부위 이득 시간을 제한하고 마우스가 실험실에서 최소 1시간 동안 자유롭게 움직이도록 합니다.
실험 기간 동안 동일한 기록 화면에서 EEG 및 EMG 신호를 모니터링합니다. 각 상태를 쉽게 구별할 수 있도록 각 파동에 대한 게인 컨트롤을 사용하여 각성, 비급속 안구 운동 수면 또는 급속 안구 운동 수면으로 마우스의 상태를 평가합니다. 각성 잠복기까지의 비급속 안구 운동 수면을 측정하기 위해 40초 동안 안정적인 비급속 안구 운동 수면을 관찰한 다음 광자극을 위해 패턴 발생기를 켜고 이식된 광섬유에 대한 레이저 방출을 확인합니다.
그런 다음 수면 상태가 각성으로 바뀔 때까지 EEG/EMG 신호를 기록합니다.
