빛 유도 청각 자극을 위한 마우스 등쪽 달팽이관 핵으로의 바이러스 매개 유전자 전달

0 조회수3:19 • August 29th, 2025

두개골이 노출된 마취된 쥐부터 시작합니다.

개골은 정중선 왼쪽, 램도이드 봉합사의 꼬리 부분에 대한 두개골 절개술을 특징으로 하며, 소뇌를 노출시키기 위해 경막을 제거합니다.

외측 좌측 소뇌를 흡인하여 청각 신호를 처리하는 뉴런을 포함하는 뇌간 구조인 밑에 있는 등쪽 달팽이관 핵 또는 DCN을 드러냅니다.

혈액 응고를 방지하고 잔류 체액을 제거하기 위해 식염수를 첨가하십시오.

빛에 민감한 이온 채널인 옵신을 암호화하는 바이러스 벡터가 들어 있는 마이크로 시린지를 배치합니다.

바늘을 DCN으로 내립니다.

바이러스 현탁액을 제어된 속도로 주입한 다음 바늘을 빼냅니다.

절개 부위를 봉합하고 마우스가 회복되도록 합니다.

주입된 바이러스는 DCN 신경 수용체에 결합하여 엔도사이토시스를 겪습니다.

신경핵 내부에서 바이러스 DNA는 유전자 발현을 유발하여 옵신 생산을 유도합니다.

모델은 청각 경로의 빛 유도 자극을 위한 준비가 되어 있습니다.

5개의 프렌치 흡입 튜브를 사용하여 DCN 위에 있는 왼쪽 소뇌의 가장 측면 부분을 흡인합니다. 흡인을 지원하려면 현미경의 초점면을 달팽이관 핵의 예상 깊이로 설정하여 시각화를 개선하고 선명한 이미지를 보장합니다. 왼쪽 소뇌의 약 4분의 1에서 1/3을 제거합니다.

DCN에 인접한 주요 랜드마크는 상반고리관의 팽대부입니다. 흡인 후 추가 출혈, 대뇌척수액 축적 및 DCN의 소뇌 변위가 나타납니다. 혈액 응고를 방지하기 위해 개두술에 식염수를 빠르게 주입하십시오. 치과용 포인트와 흡입으로 부드럽게 두드리는 것을 조합하여 DCN을 직접 시각화할 수 있는 경로를 비우십시오.

DCN이 명확하게 보이고 위에 있는 혈액과 CSF가 없으면 5마이크로리터 기밀 해밀턴 주사기를 사용하여 벡터를 압력 미세 주입합니다. 얕은 경사가 있는 34게이지 바늘을 사용하여 둔기 외상을 최소화하고 DCN 내에서 주입량을 국소화합니다. 그런 다음 DCN 표면 아래에서 팁이 더 이상 보이지 않을 때까지 마이크로 매니퓰레이터로 바늘을 천천히 삽입합니다.

1.5마이크로리터의 벡터 주입을 시작합니다. 이 작업이 완료되면 바늘을 천천히 빼낸 다음 피부에 다시 근사치를 대고 표준 회복 절차에 따라 마우스가 회복되도록 합니다.

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마지막 업데이트: 29 8월 2026