외상성 뇌손상이 있는 마우스에 신경 세포 현탁액의 정위 이식

정위 주사기 펌프에 부착된 사전 로드된 주사기로 시작합니다.

사기에는 인간 유도 만능 줄기 세포 유래 신경 세포 현탁액이 포함되어 있습니다.

외상성 뇌 손상이 있는 마우스의 외과적으로 노출된 뇌 피질 위에 바늘을 놓습니다.

주사기를 내려 바늘 끝으로 경막에 닿게 하고 부상 부위를 목표로 좌표를 조정한 후 약간 후퇴시킵니다. 이제

작은 절개를 만들어 바늘의 진입점을 설정합니다.

그런 다음 플런저를 내려 세포 현탁액의 흐름을 허용합니다.

바늘을 내리고 뇌를 관통하여 심부 피질의 회백질-백질 경계에 도달합니다.

마지막으로 수분을 유지하기 위해 수술 부위에 식염수를 세척하면서 세포 현탁액을 천천히 주입합니다.

완료되면 바늘을 빼내고 다시 세척한 후 절개 부위를 닫습니다.

시간이 지남에 따라 이식된 세포는 성숙하고 신경 회로를 회복하며 뇌 손상을 복구합니다.

두개골 절제술 후 약 24시간 후에 마우스를 정위 고정 프레임에 다시 놓습니다.

천공이 있는 수술용 드레이프로 마우스를 덮습니다. 절개 부위를 멸균 식염수로 세척하여 해당 부위를 청소하고 봉합사를 풉니다. 에탄올 70%를 적신 면봉을 사용하여 절개 부위를 부드럽게 살균하고 가는 핀셋과 안과용 가위를 사용하여 봉합사를 제거합니다.

그런 다음 수술 부위와 두개골 절제술 부위를 풍부한 멸균 식염수로 세척합니다. 세포 배양 생물 안전 후드에서 세포 튜브를 부드럽게 휘젓거나 두드려 균질한 세포 현탁액을 확보합니다. 마이크로피펫을 사용하여 플런저 끝을 통해 약 7.5마이크로리터의 세포를 해밀턴 주사기에 넣습니다.

플런저 끝이 아래를 향하도록 주사기를 120도 각도로 잡고 서스펜션과 플런저 팁 사이에 기포가 생기지 않도록 주의하면서 플런저를 삽입합니다. 개스킷 어셈블리를 피펫 바늘에 부착하고 바늘을 주사기에 부착합니다. 플런저를 눌러 세포 현탁액을 피펫 바늘로 옮기고 주사기를 정위 주사기 펌프에 부착합니다.

플런저를 전진시켜 주사기 펌프 어셈블리가 제대로 작동하는지 확인하고 바늘을 주입 좌표로 이동합니다. 바늘 끝을 bregma에 맞추고 x 및 y 좌표를 0으로 설정합니다. 두개골 절제술 위의 바늘 끝을 옆으로 2mm, 후방에서 1mm를 뺀 다음 바늘 끝을 경막 표면에 닿게 합니다.

바늘을 약간 올린 다음 바늘이 접촉한 위치의 경막에 작은 절개를 합니다. 정위 좌표를 z가 0으로 설정하고 플런저를 눌러 바늘을 뇌에 삽입하기 전에 세포 현탁액이 적절하게 흐르고 있는지 확인합니다. 바늘을 뇌에 z의 깊이로 마이너스 1.4mm로 삽입하여 심부 피질의 회백질/백질 경계에 이식편을 배치합니다.

사기 펌프를 켜서 15분 동안 세포 현탁액을 주입합니다. 장거리 현미경을 사용하여 세포 현탁액 유출을 모니터링하고 주사 중에 멸균 식염수로 수술 부위를 세척하여 조직 수화를 유지합니다. 모든 세포가 전달되면 이식 바늘을 천천히 빼내고 추가 식염수로 수술 부위를 세척한 후 새 봉합사로 절개 부위를 봉합합니다.

그런 다음 시연된 대로 수술 후 관리를 제공합니다.