마우스의 자궁 내 바이러스 형질도입

형질도입을 위해 원하는 유전자를 포함하는 바이러스와 추적 염료를 완충액에 혼합하여 섭취합니다.

바이러스-염료 혼합물을 끝이 가는 모세관으로 흡인합니다.

복부를 깎은 마취된 임신한 쥐를 예로 들어보겠습니다.

에탄올로 피부를 소독한 다음 베타딘 용액으로 소독합니다.

정중선 절개를 하여 복강을 노출시키고 그 위에 파라핀 필름을 씌웁니다.

자궁 뿔을 노출시키고 건조를 방지하기 위해 완충액을 붓습니다.

배아의 순서와 위치를 기록하십시오. 주사 부위에 접근하기 위해 자궁낭 내에서 배아의 위치를 조정하십시오.

바이러스-염료 혼합물을 척수와 뇌실에 주입합니다.

염료 분포를 시각화하여 정확한 주입을 보장합니다.

자궁 뿔을 복강에 다시 넣고 완충액을 붓습니다.

복강을 봉합한 다음 피부를 봉합합니다.

주입된 바이러스는 숙주 세포에 들어가 표적 유전자를 방출하고 발현을 가능하게 합니다.

원하는 표적에 대해 10-11개의 바이러스 입자를 4배 10 내지 11로 포함하는 맞춤형 모세관 팁을 흡인 튜브에 Fast Green 염료로 라벨링하여 로드하는 것으로 시작합니다. 표지된 아데노 관련 바이러스 입자 15마이크로리터를 모세관에 첨가합니다.

다음으로, 마취된 배아 임신 14.5일째 마우스의 발가락 꼬집기에 대한 반응 부족을 확인하고 피부를 소독한다. 구부러진 톱니 모양의 홍채 집게와 직선 텅스텐 카바이드 가위를 사용하여 정중선을 따라 피부 절개를 합니다. 직선 Dumont 핀셋을 사용하여 복막벽을 잡고 직선 Vannas 가위로 백선을 따라 계속 진행하고 복부 입구 위에 천공 파라핀 필름 조각을 놓고 숟가락 모양의 장치를 사용하여 뿔 내부의 배아를 손상시키지 않고 자궁 뿔을 노출시킵니다.

섭

씨 37도의 PBS를 자궁 뿔에 몇 방울을 떨어뜨린 후 자궁낭 내부의 손상이나 기형이 있는지 배아를 검사합니다. 각 주사에 대해 원하는 위치에 도달할 때까지 배아를 주머니 안에서 조심스럽게 돌립니다. 배아가 제자리에 있으면 각 배아에 1-2마이크로리터의 Fast Green 표지 바이러스 입자 용액을 주입합니다.

모든 배아를 주입한 후 자궁 뿔을 다시 복강에 넣고 섭씨 37도의 PBS 몇 방울을 복부에 추가합니다. 그런 다음 폴리아미드 6-0 크기 봉합사를 사용하여 복막벽을 봉합하고 폴리아미드 3-0 크기 봉합사와 Halsted의 Mosquito 지혈 겸자를 사용하여 피부를 봉합합니다.