0 조회수 • 2:30 분 • August 29th, 2025
박테리아 레지오넬라 뉴모필라 외막 소포 또는 OMV에 노출된 전처리된 대식세포가 포함된 멀티웰 플레이트로 시작합니다.
OMV 처리된 대식세포를 감염시키기 위해 정의된 박테리아 대 숙주 세포 비율로 레지오넬라 뉴모필라를 첨가합니다.
배양하는 동안 대식세포는 막에 결합된 파고솜 내에서 박테리아를 내재화합니다.
OMV 전처리는 대식세포 신호 전달을 변경하여 식체 성숙을 억제합니다.
이는 박테리아를 보호하고 세포 내 복제를 허용하는 레지오넬라균 함유 액포의 형성을 촉진합니다.
세제를 넣고 배양하여 대식세포를 용해시킵니다. 이것은 세포내 박테리아를 배지로 방출합니다.
희석된 용해물을 영양이 풍부한 한천 플레이트에 줄무늬로 만듭니다.
배양하는 동안 박테리아는 성장하여 눈에 보이는 콜로니를 형성합니다.
콜로니를 계산하여 생존 가능한 박테리아의 수를 나타내는 콜로니 형성 단위(CFU)를 결정합니다.
OMV 처리된 대식세포와 치료되지 않은 대식세포 간의 CFU 수를 비교합니다.
처리되지 않은 대식세포에 비해 OMV 처리에서 더 높은 CFU는 OMV가 대식세포 내에서 레지오넬라균 생존을 촉진한다는 것을 나타냅니다.
전처리되거나 처리되지 않은 THP-1 세포를 야생형 L.pneumophila 균주 코어 B 또는 쥐 BMDM 세포를 이 균주의 편모 결여 돌연변이로 감염시키기 위해 세포에서 배지를 변경하지 않습니다.
웰당 다섯 번째 L.pneumophila에 10의 1배에 해당하는 0.5의 MOI에서 박테리아를 추가합니다. 배양액을 각각 24시간 및 48시간 동안 배양합니다. 세포를 용해하려면 최종 농도 0.1%의 사포닌을 첨가하고 세포를 5분 동안 배양합니다.
그런 다음 BCYE 한천 플레이트에 필요한 희석액 50마이크로리터를 줄무늬로 만들고 플레이트를 3일 동안 배양합니다.
형성된 콜로니를 육안으로 육안으로 세고 텍스트 프로토콜에 따라 계산을 수행합니다.