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미생물학
0 조회수 • 2:25 분 • August 29th, 2025
별도의 한천 플레이트에서 배양된 병원성 박테리아 균주로 시작합니다.
각 균주는 보호 다당류층인 캡슐을 생성하는 유전자에 서로 다른 돌연변이를 가지고 있습니다.
플레이트에서 단일 콜로니를 영양이 풍부한 액체 배지가 들어 있는 별도의 튜브로 옮기고 배양합니다.
배양하는 동안 박테리아는 기하급수적인 성장 단계에 들어가 캡슐 생성 유전자를 발현합니다.
이러한 유전자의 돌연변이는 캡슐 생산에 변화를 일으켜 캡슐화되지 않은 세포, 약하게 캡슐화된 세포 및 심하게 캡슐화된 세포를 생성합니다.
배양액을 옮기고 원심분리하여 세포를 펠릿화합니다.
캡슐화되지 않고 약하게 캡슐화된 세포는 조밀한 펠릿을 형성하는 반면, 심하게 캡슐화된 셀
은수화된 캡슐층으로 인해 밀도가 낮은 펠릿을 형성합니다.
심하게 캡슐화된 세포를 잃지 않도록 상청액을 조심스럽게 제거하십시오.
완충액을 추가하고 다시 원심분리한 다음 상층액을 버려 잔류 배지를 제거합니다.
추가 성장을 촉진하지 않고 박테리아를 안정화시키기 위해 완충액에 세포를 재현탁하여 캡슐 구조를 보존합니다.
멸균 루프가 있는 스톡 플레이트에서 단일 콜로니를 선택하고 적절한 국물 10밀리리터를 접종합니다.
밤새 배양합니다. 그런 다음 배양물을 15밀리리터 튜브로 옮기고 원심분리합니다. 다음으로, 상청액을 버리고 펠릿을 PBS 2밀리리터에 다시 현탁합니다.
원심분리를 반복하고 생성된 상층액을 버립니다. 그런 다음 펠릿을 PBS 2밀리리터에 다시 현탁합니다.