박테리아 생물발광과 세포 밀도를 연관시키는 생체 내 분석

유도성 유전자를 포함하는 플라스미드로 형질전환된 박테리아 콜로니를 가져 가십시오.

신선한 액체 배지를 접종하기 위해 단일 콜로니를 선택합니다.

산소 공급과 균질한 박테리아 성장을 위해 흔들면서 배양합니다.

희

석된 배양 샘플을 사용하여 흡광도를 측정하고 세포 밀도를 추정합니다.

검은색 벽의 유리 바닥 웰 플레이트를 사용하여 샘플 간의 가벼운 누화를 방지하여 정확한 발광 정량화를 보장합니다.

원하는 세포 농도의 박테리아 배양액을 웰에 첨가합니다.

플라스미드 보유를 유지하기 위해 항생제를 추가합니다.

유전자 발현을 시작하기 위해 유도제를 추가합니다.

이 유전자는 특정 박테리아 단백질과 반응하여 빛을 생성하는 효소를 암호화하여 박테리아에 생물발광 특성을 부여합니다.

일정한 흔들림 모드로 온도 조절 플레이트 리더기에 넣기 전에 증발을 방지하기 위해 플레이트에 뚜껑을 덮으십시오.

정기적으로 흡광도를 기록하여 세포 수를 측정하고 빛의 강도를 측정하여 생물 발광을 모니터링합니다. 세포 밀도를 생물발광과 연관시킵니다.

하

룻밤 플레이트의 단일 콜로니로 배지 3밀리리터를 접종하고 세포를 섭씨 28도 및 180RPM에서 약 1-2시간 동안 배양합니다.

650나노미터에서 액체 배양액의 1-10 희석액의 세포 밀도를 측정합니다. 그런 다음 OD650이 0.05인 배양 1밀리리터의 비율과 부피를 계산합니다. 계산된 배양 및 배지의 부피를 유리 바닥이 있는 24웰 검은색 벽 플레이트에 피펫팅합니다.

전체 럭스 오페론을 포함하는 pET28a 벡터가 손실되지 않고 변형된 대장균 균주에서 발현되도록 하려면 1마이크로리터의 카나마이신과 1마이크로리터의 IPTG를 샘플에 추가합니다. 그런 다음 측정 중 증발을 방지하기 위해 접시에 뚜껑을 덮습니다. 마지막으로, 섭씨 28도로 설정된 플레이트 리더와 텍스트 프로토콜에 있는 스크립트를 사용하여 데이터 포인트 사이에 흔들면서 10분마다 흡광도 및 생물 발광 측정을 수행합니다.