그람 양성균의 항생제 감수성 시험을 위한 국물 미세 희석 방법

배양 플레이트에서 그람 양성 박테리아 콜로니를 분리하고 배지에 현탁시킵니다.

분석을 위한 최적의 박테리아 농도를 달성하기 위해 현탁액을 희석합니다.

농

도가 증가하는 리포글리코펩타이드 항생제를 포함하는 마이크로플레이트와 배지만 포함하는 성장 조절 웰의 테스트 웰을 접종합니다.

대조군 웰의 분취량을 배양 플레이트에 퍼뜨려 배양 순도와 박테리아 수를 확인합니다.

세포벽이 합성되는 동안 박테리아 성장을 허용하기 위해 배양합니다.

항생제는 세포벽 성분인 펩티도글리칸과 그 전구체에 결합하여 중합을 억제하고 벽을 약화시킵니다.

파괴

로 인해 삼투압이 세포 용해를 일으킬 수 있습니다.

배양 후 배양 순도와 최적의 박테리아 수를 확인합니다.

박테리아 성장이 있는지 우물을 검사하십시오.

대조군 웰은 눈에 보이는 성장을 보여주고, 성장을 완전히 억제하는 항생제 농도가 가장 낮은 테스트 웰은 최소 억제 농도(MIC)를 나타냅니다.

이 시연에서는 갓 준비한 플레이트 1개를 접종합니다. 접종물을 준비하기 위해, 18 내지 24시간 혈액 한천 또는 다른 비선택적 한천 플레이트에서 잘 분리된 여러 콜로니를 선택한다. 여기에서는 품질 관리 S. aureus 및 E. faecalis 균주가 사용됩니다.

멸균 면봉으로 각 콜로니의 상단을 만지고 그 중 일부를 1-5밀리리터의 CAMHB 또는 식염수가 들어 있는 튜브로 옮깁니다. 조제 후 15-30분 이내에 탁도가 0.5 McFarland 표준과 일치할 때까지 계속 옮기고, 접종물을 CAMHB에서 1-100으로 희석하여 밀리리터당 5번째 CFU에 5배 10의 최종 농도에 도달합니다. 허용 범위는 밀리리터당 2-8배 10에서 5번째 CFU입니다.

멸

균 팁이 있는 다중 채널 피펫을 즉시 사용하여 최종 접종물 50마이크로리터를 MIC 패널 플레이트의 각 적절한 웰로 옮깁니다. 여기서, 분리주당 총 4번의 반복을 위해 4개의 행에 2개의 분리주 각각을 접종합니다. 다음으로, 순도 검사를 수행하기 위해, 피펫을 사용하여 양성 성장 대조군에서 1 내지 10마이크로리터의 용액을 비선택적 한천, 예를 들어 5% 양의 피가 함유된 트립티카제 대두 한천과 같은 비선택적 한천으로 옮긴다.

멸균 루프를 사용하여 용액을 플레이트 표면에 펴 바릅니다. 플레이트를 90도 돌리고 다시 줄무늬를 그려 접종물이 고르게 분포되도록 합니다. 접시를 덮고 따로 보관하십시오.

콜로니 카운트를 준비하기 위해, 단일 채널 피펫을 사용하여 성장 조절 웰에 있는 용액