0 조회수 • 3:06 분 • September 26th, 2025
영양이 풍부한 배지에서 성장한 결핵균 군집이 포함된 한천 플레이트로 시작합니다.
영양이 보충된 국물에 단일 콜로니를 접종하고 균일한 성장을 위해 교반하면서 배양합니다.
배양이 세포가 대사적으로 활성화되는 후기 로그 단계에 도달하도록 합니다.
농축된 한천 플레이트에 소량의 피펫을 넣고 고르게 펴고 연속적인 박테리아층이 형성될 때까지 배양합니다.
멸균 면봉에 저철분 최소 배지(LIMM)를 적셔 박테리아를 수집합니다.
철 오염을 방지하기 위해 LIMM이 들어 있는 플라스틱 용기에 현탁하십시오.
뭉침을 방지하기 위해 분산제를 첨가하고 흔들지 않고 배양합니다.
철분 제한 조건에서 박테리아는 스트레스 반응을 활성화하고 세포질에서 철포어를 생성합니다.
이들은 세포외 소포로 포장되어 주변으로 방출됩니다.
Siderophores는 철분을 포착하고 박테리아가 생존하도록 돕습니다.
이 시스템은 철분 제한 조건에서 마이코박테리아의 적응과 생존을 강조합니다
ADN 농축이 보충된 2밀리리터의 마이코박테리아 국물 배지에 MTB의 단일 콜로니를 접종합니다. 섭씨 37도에서 교반하면서 배양합니다. 눈에 띄는 성장이 있으면 배양액 2밀리리터를 추출하고 분광 광도계에서 OD 540을 측정합니다.
OD 540이 후기 로그 단계를 나타내는 0.8에 도달하면 배양을 중지합니다. 후기 로그 배양액 200마이크로리터를 0.2글리세롤, 0.5% 트윈 80 및 ADN이 보충된 마이코박테리아 한천 플레이트에 퍼뜨립니다. 최소 5개의 플레이트를 접종하십시오.
플레이트를 섭씨 37도에서 배양합니다. 그리고 일주일 후에는 박테리아 성장이 합류층으로 보입니다. 그런 다음 멸균 면봉을 저철 최소 매체에 적십니다.
이 면봉을 사용하여 한천 플레이트에서 박테리아를 수집하십시오. 튜브에 담긴 100밀리리터의 저철분 최소 배지에 박테리아를 접종합니다. OD 540이 1인 현탁액을 준비하기에 충분한 박테리아를 수집합니다.
현탁액을 저철분 최소 매체로 1리터에 10배 희석하고 멸균 플라스틱 병 2개로 나눕니다. 다음으로, 배양액 2밀리리터를 5밀리리터 배양 튜브로 옮깁니다. 10 부피 비율의 10 마이크로리터를 추가합니다.
배양액을 섭씨 37도에서 14일 동안 배양합니다.