0 조회수 • 3:12 분 • September 26th, 2025
홈으로 성형된 아가로스 챔버가 포함된 접시로 시작하십시오.
각 홈에는 마취제가 보충된 배아 배지에 잠긴 마취된 제브라피쉬 배아가 있습니다.
광학 현미경으로 근육 조직에 미세 주입 바늘을 삽입합니다.
S. aureus와 폴리스티렌 마이크로스피어가 포함된 현탁액을 주입하여 임플란트 관련 감염을 모델링합니다.
주입된 배아를 신선한 배지로 채워진 멀티웰 플레이트의 개별 웰로 옮기고 배양합니다.
마이크로스피어는 박테리아 집락화를 지원하고 감염을 촉진하는 물리적 표면을 제공합니다.
임플란트 관련 세균 감염을 평가하려면 각 배아를 별도의 튜브로 옮기고 완충액으로 세척하십시오. 완충액과 세라믹 비드를 추가합니다.
균질화하여 배아를 용해하고 박테리아를 포함한 내부 내용물을 방출합니다.
희석된 균질을 도금한 다음 배양하여 콜로니 형성을 허용합니다.
마이크로스피어-박테리아 현탁액을 주입한 배아는 박테리아 현탁액만 주입한 배아보다 더 높은 콜로니 수를 나타냅니다. 이것은 마이크로스피어가 감염 감수성을 증가시킨다는 것을 나타냅니다.
배아가 마취될 때까지 5분 동안 기다린 후, 주입을 위해 홈 내의 배아를 단일 방향으로 정렬합니다. 마이크로인젝터를 적절한 주입 설정으로 설정하고 실체 현미경에서 첫 번째 배아의 근육 조직에 45-60도 각도로 바늘을 삽입합니다.
필요에 따라 바늘을 앞뒤로 부드럽게 움직여 조직 내 위치를 조정하고 마이크로인젝터 풋 페달을 사용하여 로드된 현탁액을 주입합니다. 박테리아 마이크로스피어 현탁액을 제브라피쉬 배아 조직에 주입할 때 바늘은 부드럽지만 꾸준한 손으로 삽입해야 합니다. 성공적으로 삽입한 후에는 사출 전에 재료를 위한 공간을 만들어야 합니다.
그리고 매일 배지를 변경하여 48웰 플레이트의 개별 웰에서 트리카인 없이 E3 배지에서 배아를 유지합니다. 콜로니 형성 단위 정량화에 의해 감염 진행을 모니터링하기 위해, 주사 직후 5-6개의 생존 가능한 감염 배아를 개별 2밀리리터 마이크로튜브로 무작위로 옮기고 멸균 PBS로 배아를 부드럽게 세척합니다. 세척물을 폐기한 후 각 튜브에 100마이크로리터의 멸균 PBS를 추가한 다음 2-3개의 멸균 직경 2mm 지르코니아 비드를 추가합니다.
그런 다음 균질화기에서 3,500rpm에서 30초 동안 배아를 분쇄하고 시연된 대로 균질화를 배양합니다.