단일 세포 박테리아 접종물의 제조

Mycobacterium marinum 의 대사 활성 배양액을 섭취하십시오.이는 높은 박테리아 생존력과 최적의 생리적 상태를 보장합니다.

배양물을 원심분리하여 박테리아를 펠릿화합니다.

여분의 상청액을 버리고 분산제가 포함된 신선한 배지에 펠릿을 재현탁합니다.

현탁액을 미세 원심분리기 튜브로 옮기고 통제된 조건에서 초음파 처리합니다.

초음파 처리는 박테리아 응집체를 파괴하고 세포를 분산시켜 생존 가능한 단일 세포 현탁액을 생성합니다.

초음파 처리된 현탁액을 주사기에 모아 멤브레인 필터를 통과시켜 남아 있는 덩어리를 제거하여 균일한 단일 세포 집단을 보장합니다.

분광 광도계를 사용하여 박테리아 현탁액의 광학 밀도를 측정합니다.

현탁액을 신선한 냉동 보호제 함유 배지로 희석하여 세포 생존력을 유지하면서 원하는 박테리아 농도에 도달합니다.

최종 단일 셀 현탁액을 분취하여 초저온에서 보관합니다. 냉동 보호제는 장기간 보관하는 동안 박테리아 생존력을 유지하는 데 도움이 됩니다.

원고에 따라 접종 후, 배양액을 3000배 G에서 10분 동안 원심분리하여 마이코박테리움 마리눔을 펠릿으로 수집한다. 300마이크로리터를 제외한 상층액을 모두 버리고 펠릿을 다시 현탁시킵니다.

10% 글리세롤과 함께 7H9 배지 3밀리리터를 첨가하여 펠릿을 추가로 재현탁시킨 다음 100와트의 수조에서 현탁액을 15초 켜고 15초 동안 꺼진 상태에서 총 2분 동안 초음파 처리하여 단일 세포 균질을 얻습니다. 박테리아 현탁액을 10밀리리터 주사기에 옮기고 5미크론 필터를 통과시켜 박테리아 덩어리를 제거합니다. 분광 광도계를 사용하여 현탁액의 광학 밀도를 측정하고 10% 글리세롤을 함유한 7H9 배지로 OD 600으로 희석합니다.

현탁액을 10마이크로리터 분취량으로 나누고 추가 사용을 위해 섭씨 영하 80도의 냉동실에 보관합니다.