0 조회수 • 2:48 분 • September 26th, 2025
인산염 완충 식염수에 용해된 아밀로이드 특이적 형광 염료인 티오플라빈 T의 작동 용액이 들어 있는 큐벳을 가져 가십시오.
큐벳을 분광형광계에 넣고 기준선 형광 신호를 기록합니다.
스캔을 일시 중지하고 큐벳을 제거합니다.
독성 슈도모나스 박테리아에 감염된 폐 내피 세포에서 수집한 필터 멸균 배양 상청액을 첨가합니다.
상청액에는 잘못 접힌 베타 시트가 풍부한 단백질인 아밀로이드 응집체가 포함되어 있습니다.
균일한 분포를 보장하기 위해 내용물을 반전시켜 부드럽게 혼합하십시오.
분광형광계에 큐벳을 다시 로드하고 스캔을 재개하여 시간 기반 형광 신호를 획득합니다.
티오플라빈 T는 베타 시트가 풍부한 아밀로이드에 특이적으로 결합하여 형광을 향상시킵니다.
동일한 설정을 사용하여 형광 스캔을 수행합니다.
기준선에 대한 형광의 증가는 배양 상청액에서 감염 유발 아밀로이드의 존재 및 상대적 풍부함을 나타냅니다.
상청액 내의 아밀로이드를 정량화하려면 새로 준비 및 여과된 50X 티오플라빈 T 원액 20마이크로리터를 1밀리리터 분광 광도계 큐벳의 PBS 1밀리리터에 넣고 희석된 샘플을 분광형광계에 로드합니다.
425나노미터 여기를 사용하여 기준선 형광 방출을 측정합니다. 450에서 575나노미터까지의 형광 방출을 2나노미터 단위로 스캔합니다. 그런 다음 425나노미터 여기와 482나노미터 방출을 사용하여 60초 동안 0.2초마다 데이터 수집을 사용하여 타임랩스 스캔을 수행하도록 기기를 설정합니다.
20초 후에 스캔을 일시 중지하고 10마이크로리터의 필터 멸균 상청액을 큐벳에 추가합니다. 반전으로 혼합한 후 큐벳을 분광형광계에 다시 로드하고 마지막 40초 동안 시간 기반 스캔을 재개합니다. 시간 경과가 완료되면 원래 스캔 설정을 사용하여 최종 형광 방출 스펙트럼 스캔을 수행합니다.