항생제 스트레스 하에서 녹농균 의 떼 행동

인쇄된 템플릿 위에 한천 플레이트를 놓아 중앙과 6개의 균일한 간격의 위성 스팟을 정렬합니다.

접시 중앙에 건강한 녹 농균 배양액이 있습니다.

동일한 배양액과 항생제의 혼합물을 위성 스팟에 놓습니다.

빛 반사를 줄이기 위해 검은색 뚜껑으로 접시를 덮으십시오.

박테리아 성장을 유지하기 위해 일정한 온도와 습도가 있는 인큐베이터 내부의 스캐너에 올려 놓습니다.

중앙에 있는 건강한 박테리아는 한천 표면을 가로질러 방사되는 덩굴손과 같은 떼 패턴으로 성장하고 바깥쪽으로 퍼집니다.

항생제와 혼합된 박테리아는 스트레스를 받고 한천을 통해 확산되는 화학적 신호를 방출합니다.

떼가 이 구역에 도달하면 스트레스 신호를 감지합니다.

이것은 회피 반응을 유발하여 박테리아 성장을 항생제에 노출된 영역에서 멀어지게 합니다.

타임랩스 이미징은 항생제 스트레스 하에서 박테리아 성장과 군집 확장의 변화를 보여줍니다.

떼를 지어 한천 도금을 위해, 하룻밤 동안 P. aeruginosa 에서 5마이크로리터를 넣은 P20 피펫 팁을 하나의 떼 플레이트의 중심에서 2-1/2센티미터 위 10-45도 각도로 잡고 플런저를 첫 번째 정지 지점까지 눌러 액체 방울만으로 한천에 닿습니다. 템플릿을 사용하여 다양한 군집 한천 플레이트에 스팟을 일관되게 배치합니다.

항생제 처리를 플레이트하려면 하룻밤 배양된 P. aeruginosa 의 30마이크로리터를 관심 항생제의 적절한 농도 및 부피와 혼합하고 접시 중심을 중심으로 반경 2.8센티미터 동심원의 6개 등거리 위성 위치에 항생제 처리된 박테리아 6마이크로리터를 즉시 추가합니다. 템플릿을 사용하여 다양한 군집 한천 플레이트에 스팟을 일관되게 배치합니다.

모든 배양액이 도금되면 투명한 페트리 접시 뚜껑을 맞춤형 검은색 뚜껑으로 교체합니다. 습도를 75%로 유지하기 위해 섭씨 37도로 설정된 인큐베이터에 있는 10리터 수조의 스캐너에 떼를 지어 한천 플레이트를 조심스럽게 놓습니다.