Vibrio parahaemolyticus의 군집 세포로의 분화 유도

0 조회수3:55 • September 26th, 2025

박테리아 성장을 지원하는 용융된 한천 배지로 시작하십시오.


철분 킬레이트제를 첨가하여 유리 철분을 고갈시키고 배지에 칼슘을 보충하십시오.


배지를 접시에 붓고 굳힌 다음 건조시켜 잔류 수분을 제거합니다.


편모가 있는 박테리아인 Vibrio parahaemolyticus의 국물 배양을 생각해 보십시오.


액체 매질에서 박테리아는 편모가 있는 짧은 막대 모양의 수영 형태로 존재합니다.


접시에 배양액을 놓고 건조시켜 박테리아가 표면과 접촉하도록 합니다.


접시를 밀봉하고 배양하여 박테리아의 휘발성 대사 부산물이 축적되도록 합니다.


표면 접촉, 철분 제한, 칼슘 가용성 및 축적된 부산물은 유전자 발현을 유도하여 측면 편모를 포함하는 길쭉한 군집 세포로의 분화를 촉발하여 고체 표면을 가로지르는 움직임을 가능하게 합니다.


떼 세포는 바깥쪽으로 확장되어 완전히 분화된 세포로 구성된 떼 플레어를 형성하여 성공적인 분화를 나타냅니다.


떼 접시를 만들기 위한 한천 용액을 준비하려면 심장 주입 또는 H. I. 한천 분말 4g과 이중 증류수 100밀리리터를 현탁시킵니다.


H. I. 한천 용액을 전자레인지에 조심스럽게 끓여서 분말이 녹을 때까지 수시로 병을 흔듭니다. 한천 용액을 섭씨 121도에서 20분 동안 오토클레이브하고 한천 용액을 섭씨 60도에서 65도까지 식히고 계속 저어줍니다. 다음 단계는 독성이 강한 2,2'-비피리딜을 다루는 것이므로 장갑과 보안경을 착용해야 합니다.


2,2'-비피리딜을 50마이크로몰의 최종 농도까지 첨가합니다. 염화칼슘을 최종 농도 4밀리몰까지 첨가합니다. 단일 콜로니의 가장자리에서 소량의 V. parahaemolyticus 세포를 5밀리리터의 LB 국물에 접종합니다.


셰이커 인큐베이터에서 배양액이 0.8의 600나노미터에서 광학 밀도에 도달할 때까지 섭씨 37도에서 배양합니다. 보통 2-3시간 정도 소요됩니다. 세포 배양이 성장하는 동안, 최종 H. I. 한천 용액 30 내지 35 밀리리터를 원형 150 밀리미터 페트리 접시에 피펫팅하고 한천을 응고시키십시오.


세포 배양을 발견하기 직전에 한천 플레이트를 열어 섭씨 37도에서 최소 10분 동안 또는 액체 잔류물이 사라질 때까지 똑바로 세워서 건조시키되 더 이상 건조하지 마십시오. H. I. 한천 떼 플레이트의 중앙에 1마이크로리터의 세포 배양물을 발견하고 그 지점을 건조시킵니다. 투명한 플라스틱 테이프로 플레이트를 밀봉하고 기포가 형성되고 테이프에 접히지 않도록 주의하십시오.


플레이트를 섭씨 24도에서 밤새 배양합니다. 이로 인해 이 타임랩스 비디오 클립에서 볼 수 있듯이 군집의 중심에서 확장되는 군집 플레어가 있는 V. parahaemolyticus 군집 군집이 형성됩니다.
 

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마지막 업데이트: 22 8월 2026