0 조회수 • 2:37 분 • September 26th, 2025
두 가지 박테리아 균주, 즉 참조 균주와 경쟁균주로 시작하며, 각각 균주 식별을 위한 고유한 형광 마커를 발현합니다.
균주를 같은 비율로 혼합하고 혼합물을 한천 접시에 놓습니다.
균주가 성장하고 상호 작용할 수 있도록 플레이트를 배양합니다.
경쟁자는 접촉 의존 또는 접촉 독립 메커니즘을 통해 기준 변형률을 능가합니다.
접촉 의존적 경쟁에서 경쟁자는 특수 분비 시스템을 사용하여 독소를 참조 균주에 직접 전달합니다.
접촉 독립적인 경쟁에서 경쟁자는 주변 매체로 확산되어 참조 균주에 들어가는 독소를 방출합니다.
이러한 독소는 세포벽 합성, DNA 복제, 단백질 합성 등 참조 균주의 필수 과정을 방해하여 성장 정지, 세포 사멸 및 형광 발현 감소를 초래합니다.
배양 후 형광 현미경으로 플레이트를 검사합니다.
경쟁사의 더 밝은 형광에 비해 참조 균주의 형광이 감소하면 경쟁 상호 작용을 나타냅니다.
기준 균주와 경쟁 균주를 1:1 비율로 혼합하려면 OD 1.0으로 정규화된 각 균주 100마이크로리터를 표지된 1.5밀리리터 원심분리기 튜브에 넣고 1-2초 동안 소용돌이치게 합니다. 대조군으로서, 기준 균주를 차등적으로 태그가 지정된 버전 자체와 소용돌이도 혼합합니다.
실험 결과를 크게 바꿀 수 있으므로 올바른 시작 비율을 달성하는 것이 중요합니다. 성공을 보장하기 위해 이 단계에서는 주어진 박테리아 종에 대한 최적화가 필요할 수 있습니다. 각 생물학적 복제에 대해 이 단계를 반복한 후, 차등적으로 태그된 참조 균주를 대조군으로 사용하는 4개의 생물학적 복제와 차등적으로 태그된 참조 및 경쟁 균주를 갖는 4개의 생물학적 복제가 있어야 합니다.
배양 후 형광 현미경에 사용할 배양 스팟을 만들려면 LBS 한천이 포함된 페트리 플레이트에 각 대조군 및 실험 혼합물 10마이크로리터를 추가합니다. 반점이 벤치에서 완전히 건조된 후 플레이트를 섭씨 24도에서 24시간 동안 배양합니다.