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미생물학
0 조회수 • 2:28 분 • September 26th, 2025
병원성 혐기성 박테리아인 클로스트리디오이데스 디피실(Clostridioides difficile)에 감염된 장이 있는 안락사된 제브라피쉬 유충으로 시작하십시오.
유충의 상부 등쪽 몸통을 고정하고 머리를 제거하여 내부 장기를 노출시킵니다.
등쪽 몸통 중앙을 고정하고 체강에서 장을 부드럽게 분리합니다.
분리된 장을 완충액이 들어 있는 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
유봉을 사용하여 장을 균질화하여 조직을 파괴하고 장내 미생물을 방출합니다.
균질을 항생제가 보충된 선택적 사육 배지가 들어 있는 튜브로 옮깁니다.
혐기성 챔버에서 균질을 배양합니다.
혐기성 조건은 호기성 박테리아의 성장을 억제하는 반면, 항생제는 천연 혐기성 장내 미생물의 성장을 구체적으로 표적으로 삼고 억제합니다.
클로스트리디오이데스 디피실은 이러한 항생제에 저항하고 혐기성 조건에서 증식합니다.
사육 배지의 영양분과 성장 인자는 세포 분열을 더욱 촉진하여 생존 가능한 클로스트리디오이데스 디피실의 성장을 가능하게 합니다.
감염된 제브라피쉬 유충을 안락사시킨 후 머리에 가까운 제브라피쉬 유충의 등줄기에 바늘을 삽입하여 제브라피쉬를 고정시킵니다. 란셋으로 아가미 뒤의 머리를 제거합니다.
등쪽 몸통 중앙에 두 번째 바늘을 삽입합니다. 제브라피쉬의 복부에 세 번째 바늘을 삽입하고 체강 밖으로 장을 당깁니다. 미세 주입 바늘을 사용하여 10-15개의 장을 200마이크로리터의 멸균 1X PBS가 들어 있는 1.5밀리리터 튜브로 옮깁니다.
유봉으로 장을 균질화하여 조직을 파괴하고 균질화를 준비합니다. 유봉이 튜브 바닥에 도달하여 모든 장을 완전히 파괴하십시오. 균질산염에 타우로콜레이트 유무에 관계없이 D-사이클로세린 및 세폭시틴을 함유하는 클로스트리디오이데스 디피실 사육 배지를 첨가하고 혐기성 챔버에서 배양합니다.