유산균의 부활과 성장

산소 없이 자라는 혐기성 미생물인 유산균의 냉동 글리세롤 스톡으로 시작하십시오.

냉동은 박테리아를 추위로 인한 스트레스에 노출시켜 세포 기능을 저하시킵니다.

튜브를 소용돌이쳐 세포를 재현탁시키고 분취량을 영양 국물로 옮깁니다. 혐기성 조건에서 배양합니다.

이러한 환경에서 박테리아는 혐기성 대사를 통해 에너지를 생성하여 회복을 지원하고 세포 활동을 회복시킵니다.

배양액을 신선한 국물에 옮겨 빠른 세포 분열을 위한 새로운 영양분을 제공합니다.

활발하게 성장하는 세포는 배지를 산성화하여 회복과 성장을 나타냅니다.

한천 접시에 배양액을 줄무늬로 줄지어 줍니다. 박테리아 성장을 지원하기 위해 혐기성 조건에서 배양합니다.

대사적으로 활발한 세포는 눈에 보이는 콜로니를 형성하는 반면, 손상되거나 비활성 세포는 성장하지 못합니다.

분리된 콜로니를 신선한 국물, 소용돌이로 옮기고 혐기성 배양하여 순수하고 고성능 배양을 얻습니다.

이 방법은 다운스트림 응용 분야를 위해 생존 가능한 세포를 복원합니다.

준비된 유산균 또는 LAB 균주의 글리세롤 스톡을 섭씨 영하 80도의 초저온 냉동고에서 2밀리리터 원심분리기 튜브에 넣습니다.

사용하기 전에 해동하지 마십시오. 원심분리기 튜브의 입구를 70% 알코올로 세척 및 소독하고 사용하기 전에 부드럽게 소용돌이치십시오. 원심분리기 튜브에서 신선한 2밀리리터 MRS 시험관으로 약 250마이크로리터의 스톡 LAB 배양물을 피펫팅합니다.

시험관을 부드럽게 소용돌이치고 파라필름을 한 다음 섭씨 42도에서 12-16시간 동안 밤새 혐기적으로 배양합니다. 다음으로, 2밀리리터 MRS 시험관에서 하룻밤 동안 성장한 배양액에서 약 500마이크로리터를 신선한 7밀리리터 MRS 시험관으로 가져다가 소용돌이치고 섭씨 42도에서 밤새 12-16시간 동안 혐기적으로 배양합니다. UV 가시광선 분광 광도계를 사용하여 610나노미터에서 배양물의 광학 밀도 또는 성장을 측정하여 미생물 성장을 평가하고 0.7에서 0.9 사이의 허용 가능한 결과를 기록합니다.

7밀리리터 MRS 튜브에서 하룻밤 배양액을 MRS 및 MRCMPYR 한천 플레이트에 줄무늬로 옮기고 섭씨 42도에서 72시간 동안 혐기성 배양합니다. 한천 플레이트에서 분리된 콜로니를 골라 신선한 7밀리리터 MRS 시험관으로 옮기고 부드럽게 소용돌이치고 섭씨 42도에서 밤새 12-16시간 동안 혐기적으로 배양합니다. 분리된 균주가 들어 있는 한천 플레이트를 섭씨 4도에서 냉장고에 일주일 동