0 조회수 • 2:45 분 • September 26th, 2025
미세 기계 밸브로 분리된 성장 및 약물 챔버가 있는 미세유체 칩을 가져 가십시오.
배지에 현탁된 야생형 및 TMP 내성 돌연변이 대장균 균주를 압력을 사용하여 성장 챔버에 로드하며, 여기서 트리메토프림(TMP)이 항생제로 테스트됩니다.
다음으로, 박테리아의 세포 스트레스를 유도하기 위해 저농도의 TMP를 함유한 배지를 약물 챔버에 로드합니다.
미세 기계 밸브를 작동시켜 TMP가 성장 챔버로 확산되도록 하여 TMP가 박테리아에 들어갈 수 있도록 합니다.
도립 현미경 스테이지에 장착된 인큐베이터 내에 칩을 놓고 타임랩스 이미징을 시작합니다.
야생형 대장균에서 TMP는 효소 디하이드로엽산 환원효소에 결합하여 디하이드로엽산 결합을 방지하고 스트레스로 인한 필라멘트 형성 및 박테리아 증식 감소를 유발합니다.
그러나 돌연변이 균주의 변경된 DHFR 구조는 TMP 결합을 방지하여 정상적인 증식을 허용합니다.
타임랩스 이미지를 관찰하십시오.
야생형 대장균 은 TMP 처리 하에서 필라멘트 형성과 증식 감소를 나타내는 반면, 돌연변이 균주는 정상적인 형태와 증식을 나타내어 항생제 내성을 나타냅니다.
매일 냉동된 샘플을 실온에서 5분 동안 해동한 후 새 시험관에 신선한 M9 배지를 접종합니다.
샘플을 섭씨 37도의 흔들리는 인큐베이터에 밤새 넣습니다. 다음날 M9 배지를 사용하여 미생물 샘플을 10배 희석하고 미생물 샘플 용기를 5 PSI로 가압하여 미세유체 장치에 로드합니다. 그런 다음 TMP 용기가 있는 M9를 5 PSI에서 가압하여 TMP 함유 매체를 칩에 로드합니다.
미세유체 칩의 두 챔버 사이의 마이크로 기계식 밸브를 15분 동안 작동시켜 미생물과 약물 사이의 혼합을 실행합니다. 마지막으로 도립 현미경에 장착된 현미경 인큐베이터에 미세유체 칩을 놓습니다. CCD 카메라를 사용하여 8시간 동안 매시간 성장 챔버에서 세포 이미지를 획득합니다.
텍스트 프로토콜에 따라 셀 번호 데이터를 계산합니다.