분자 분석을 위한 물 샘플에서 항생제 내성 박테리아 분리

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수인성 박테리아가 포함된 물 샘플로 시작하여 여과하여 잔해물을 제거합니다.

희석된 여과액을 각각 특정 항생제가 보충된 저영양 한천 플레이트에 옮깁니다. 여과액을 바르고 배양합니다.

특정 항생제 내성 유전자를 운반하는 박테리아는 해당 항생제 플레이트에서 성장하여 콜로니를 형성합니다.

콜로니를 계산하여 항생제 내성 박테리아의 수를 나타내는 콜로니 형성 단위(CFU)를 결정합니다.

각 플레이트에서 단일 콜로니를 선택하고 멸균 증류수에 현탁합니다.

현탁액을 가열하여 세포를 용해하고 항생제 내성 유전자를 포함하는 박테리아 DNA를 포함한 세포내 내용물을 방출합니다.

튜브를 원심분리하여 파편을 분리하고 DNA가 포함된 상청액을 수집합니다.

추출된 DNA에 증폭 시약을 추가합니다.

튜브를 열 순환기에 넣고 프로그램을 실행하여 박테리아 DNA의 특정 영역을 증폭합니다.

증폭된 DNA는 항생제 내성 유전자를 식별하기 위한 서열 분석을 위한 준비가 되었습니다.

물 샘플을 멸균 모슬린 천으로 여과하여 미립자 물질을 제거하여 무균 처리합니다. 그런 다음 추가 분석을 위해 여과된 물 샘플을 연속적으로 희석합니다. 항생제 내성 박테리아 수를 결정하려면 섭씨 약 40도에서 변형된 멸균 용융 R2A 한천 20밀리리터가 들어 있는 튜브에 항생제를 별도로 추가합니다.

소용돌이치면서 고르게 섞고 한천이 굳기 전에 멸균 페트리 플레이트에 붓습니다. 100마이크로리터의 박테리아 현탁액을 R2A 한천 변형 플레이트를 함유한 항생제에 펴 바릅니다. 플레이트를 섭씨 35도에서 37도에서 48시간 동안 배양한 다음 박테리아 수를 측정합니다.

PCR을 위해 분리주로부터 DNA 주형을 준비하기 위해 멸균 이쑤시개를 사용하여 페트리 플레이트에서 성장하는 분리주의 단일 분리된 순수 콜로니를 채취합니다. 박테리아 콜로니를 마이크로 원심분리기 튜브에 100마이크로리터의 멸균 이중 증류수에 현탁시키고 끓는 수조 또는 섭씨 100도에서 10분 동안 끓입니다. 현탁액을 10,000g에서 2분 동안 원심분리하여 파편을 펠릿화하고 상청액을 신선한 멸균 미세 원심분리기 튜브로 옮겨 조잡한 DNA 주형으로 사용합니다.

PCR에 의해 16S rRNA 유전자의 V3 영역을 증폭하려면 PCR 튜브에 40마이크로리터의 반응 혼합물을 준비합니다. 튜브를 열 블록에 놓고 PCR 열 순환기에서 적절한 프로그램을 실행합니다.

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Last updated: 18 July 2026