0 조회수 • 3:28 분 • September 26th, 2025
산성 pH의 멸균 성장 배지가 들어 있는 탱크를 가져 가십시오.
식물 묘목이 있는 메쉬 스크린을 탱크로 옮깁니다.
뚜껑과 다공성 테이프로 밀봉하여 무균성을 유지하면서 기체 교환을 허용합니다.
배지를 통기시키기 위해 흔들면서 배양합니다.
배지를 검사하여 박테리아 오염이 없음을 나타내는 탁함이 없는지 확인하십시오.
배양 플레이트에 샘플을 찾아 배양하여 박테리아 성장이 없는지 관찰하고 오염 박테리아가 없는지 확인합니다.
식물 병원균인 아그로박테리움을 접종하고 배양합니다.
식물 뿌리 유래 신호 분자와 산성 pH는 박테리아 막 결합 센서 단백질을 활성화합니다.
활성화는 유전자 발현을 유도하여 뿌리 표면에 박테리아가 부착하기 위한 단백질을 생성합니다.
부착 후 아그로박테리움 은 분비 시스템을 통해 전달 DNA(T-DNA)로 알려진 DNA 단편을 식물 세포로 전달합니다.
식물 게놈에 통합되면 T-DNA는 박테리아 집락화를 향상시키는 신호 분자를 합성합니다.
멸균된 플로우 후드에 18밀리리터의 고압멸균된 액체 MS 배지를 멸균 뚜껑이 있는 멸균 원통형 유리 탱크에 붓습니다.
다음으로, 멸균 겸자를 사용하여 10-14일 된 묘목이 있는 각 메쉬 사각형을 반고체 배지의 페트리 접시에서 수경 원통형 탱크로 부드럽게 옮깁니다. 여기에 표시된 묘목은 알팔파입니다. 다공성 수술용 테이프를 사용하여 탱크에 뚜껑을 밀봉합니다.
그런 다음 섭씨 22-24도에서 16시간의 사진 촬영 기간과 50rpm으로 흔들어 묘목을 재배합니다. 접종하기 전에 묘목이 있는 탱크에 잠재적인 오염이 있는지 주의 깊게 검사하십시오. 오염되지 않은 탱크의 매체는 투명하고 투명해야 합니다.
탱크가 오염으로 흐려지면 폐기하고 나머지 탱크에 번호를 매깁니다. 번호가 매겨진 각 탱크에서 20마이크로리터의 수경 배지를 샘플링하여 Luria 국물 또는 LB 한천이 담긴 페트리 접시에 올려 놓습니다. 접시를 섭씨 28도에서 28시간 동안 배양합니다.
번호가 매겨진 각 수경 재배 탱크에 즉시 50마이크로리터의 Agrobacterium tumefacians 현탁액을 번호가 매겨진 각 수경 재배 탱크에 접종합니다. 묘목과 A. tumefacians 박테리아를 섭씨 22-24도에서 16시간의 사진 촬영 기간과 50rpm으로 흔들어 공동 배양합니다. 수경 성장 배지의 무균성을 확인하기 위해 배양 12시간 및 28시간 후에 점박이 있는 LB 플레이트를 검사합니다.
오염이 있는 경우 추가 다운스트림 분석을 위해 박테리아가 접종된 해당 번호가 매겨진 탱크를 사용하지 마십시오.