그람 양성 박테리아 Bacillus megaterium에서 원형질체 생성

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미생물학

0 조회수 • 3:13 분 • September 26th, 2025

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그람 양성 박테리아인 Bacillus megaterium의 배양을 예로 들어 보겠습니다.

배양액을 신선한 배지에 희석하고 진천하면서 배양하여 박테리아 분열을 촉진합니다.

배양액을 튜브로 옮기고 원심분리하여 박테리아를 펠릿화합니다.

상청액을 제거하고 프로토플라스트 용해를 방지하기 위해 삼투압 안정제가 포함된 배지에 펠릿을 재현탁합니다.

재현탁된 용액을 플라스크에 옮기고 리소자임을 첨가한 다음 흔들면서 배양합니다.

배양하는 동안 리소자임은 박테리아의 두꺼운 펩티도글리칸 세포벽을 분해합니다.

세포벽이 분해됨에 따라 박테리아는 막대 모양에서 원형질막으로만 둘러싸인 구형으로 변하여 원형질체를 형성합니다.

현미경으로 현탁액을 시각화합니다.

둥근 모양의 박테리아는 원형질체 형성을 확인하는 반면, 부풀어 오른 막대 모양의 박테리아는 불완전한 소화를 나타냅니다.

용액을 튜브로 옮기고 원심분리하여 원형질체를 펠릿화합니다.

상층액을 제거하고 추가 분석을 위해 삼투압 안정제가 포함된 신선한 배지에 원형질체를 재현탁합니다.

그람 양성 B. megaterium 프로토플라스트를 제조하기 위해, 250밀리리터 플라스크에 3% TSB의 100밀리리터에 하룻밤 박테리아 배양액을 1:1000의 비율로 희석하여 섭씨 37도에서 4.5시간 동안 배양합니다. 액체 배양액이 600나노미터에서 0.9-1.0의 광학 밀도에 도달하면 박테리아를 원심분리를 위해 두 개의 50밀리리터 원뿔형 튜브로 분리하고 시뮬로지 피펫을 사용하여 상청액을 흡인합니다. 튜브당 2.5밀리리터의 프로토플라스트 배지에 펠릿을 재현탁하고 현탁액을 단일 원추형 튜브로 당겨 125밀리리터 플라스크에서 배양합니다.

밀리리터당 5밀리그램의 리소자임 1밀리리터를 배양액에 첨가하여 섭씨 37도에서 1시간 동안 흔들면서 배양합니다. 광학 현미경으로 원형질체의 성장을 모니터링하고 구체 대신 부풀어 오른 막대로 나타나는 박테리아와 같은 불규칙성을 기록합니다. 배양이 끝나면 원심분리를 위해 현탁액을 15밀리리터 원추형 튜브로 옮기고 펠릿을 5밀리리터의 프로토플라스트 배지에 다시 현탁합니다.

그런 다음 프로토플라스트는 섭씨 영하 20도에서 최대 일주일 동안 또는 세 번의 동결 해동 주기를 거칠 때까지 보관할 수 있습니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026