거대 소포 내 박테리아의 단일 세포 배양

비오티닐화된 인지질을 포함하여 인지질로 구성된 지지막으로 코팅된 챔버형 유리 슬라이드로 시작합니다.

이중층의 비오틴에 결합하는 뉴트라비딘과 함께 배양합니다. 과도한 뉴트라비딘을 제거하기 위해 세척하십시오.

거대 소포 또는 GV를 포함하는 영양 배지를 도입합니다. 각 GV는 단일 박테리아 세포를 캡슐화하는 구형의 미크론 크기의 지질 이중층 소포로, 제한된 환경에서 개별 세포 행동을 연구하는 모델 역할을 합니다.

뉴트라비딘은 비오틴화된 GV 지질에 결합하여 정적 조건에서 안정적이고 장기간 관찰할 수 있도록 소포를 지지막에 고정합니다.

수분을 유지하고 오염을 최소화하기 위해 챔버를 밀봉하십시오.

가열 플랫폼이 장착된 현미경 스테이지에 슬라이드를 놓아 생리학적 조건을 시뮬레이션하고 현미경으로 관찰합니다.

배지의 영양분은 시간이 지남에 따라 박테리아 성장을 지원하기 위해 GV로 확산됩니다.

이 설정을 사용하면 제한된 소포 미세 환경 내에서 단일 세포 박테리아 성장을 실시간으로 시각화할 수 있습니다.

서포터 이중층 멤브레인에 거대 소포를 고정시키려면 외부 수성 거대 소포 용액에 10마이크로리터의 뉴트라비딘을 구멍에 도입하여 실온에서 15분 동안 배양합니다.

배양이 끝나면 200밀리몰 포도당을 보충한 20마이크로리터의 LB 배지로 구멍을 부드럽게 두 번 세척하고 전체 부피의 거대 소포 용액을 챔버의 구멍에 추가합니다. 그런 다음 18 x 18mm 커버 유리로 구멍을 밀봉합니다. 거대한 소포 내에서 박테리아 성장을 모니터링하려면 도립 현미경에서 40X 대물렌즈를 선택하고 챔버를 현미경 가열 스테이지 시스템에 배치합니다.

그런 다음 박테리아 세포를 함유한 거대 소포를 챔버에서 섭씨 37도에서 6시간 동안 정적인 조건으로 배양하고 과학적 상보형 금속 산화물 반도체 카메라를 사용하여 30분마다 박테리아 세포 성장 이미지를 캡처하고 기록합니다.