0 조회수 • 3:50 분 • September 26th, 2025
미리 예열된 영양 배지로 채워진 미세유체 플레이트로 시작합니다.
플레이트를 매니폴드 시스템에 부착하고 설정을 밀봉합니다. 채널을 통해 매체를 구동하여 기포를 제거합니다.
설정을 현미경 스테이지에 놓고 이미징 중 플레이트 팽창을 방지하기 위해 예열합니다.
다음으로, 배지를 제거하고 세포 입구에 박테리아 배양물을 도입하고 용액 입구에 스트레스 유도 배지를 도입합니다.
스트레스 유도 배지에는 세포 질량의 증가를 억제하지 않고 세포 분열을 중단시키는 항생제가 포함되어 있습니다.
시스템을 밀봉한 다음 세포 로딩을 시작하여 박테리아를 플레이트의 배양 챔버로 옮깁니다.
투과광을 사용하여 고르게 분포된 단일 셀이 포함된 시야를 찾습니다.
챔버에 스트레스 유도 배지를 주입하여 세포를 항생제에 노출시킵니다.
위상차 모드를 사용하여 타임랩스 이미지를 캡처하여 항생제 매개 세포 분열 억제로 인해 DNA 함량이 증가한 길쭉한 사상세포의 형성을 관찰합니다.
먼저 미세유체 플레이트에서 보존 용액을 제거하고 미세유체 소프트웨어 사용 설명서에 설명된 대로 섭씨 37도로 예열된 신선한 배지로 교체합니다. 미세유체 플레이트를 매니폴드 시스템에 부착합니다.
그리고 미세유체 소프트웨어에서 밀봉 버튼을 클릭하여 플레이트를 매니폴드 시스템에 밀봉합니다. 그런 다음 프라이밍 버튼을 클릭합니다. 매니폴드 시스템이 있는 미세유체 플레이트를 현미경 스테이지에 놓고 미세유체 챔버의 팽창을 방지하기 위해 섭씨 37도에서 2시간 동안 예열합니다.
밀봉 버튼을 클릭하여 미세유체 시스템의 미세유체 플레이트를 밀봉합니다. 웰 8의 배지를 150마이크로리터의 배양 샘플로 교체하고 웰 1에서 5까지의 배지를 스트레스 유도 시약의 유무에 관계없이 원하는 배지로 교체합니다. 미세유체 플레이트를 밀봉하고 현미경 스테이지에 놓습니다.
미세유체 소프트웨어에서 셀 로딩 절차를 실행합니다. 투과광에서 현미경으로 관찰하여 셀의 부하가 만족스러운지 확인하십시오. 투과광 모드에서 조심스럽게 초점을 맞추고 고립된 박테리아를 보여주고 과밀하지 않은 여러 시야(100제곱마이크로리터당 약 10-20개의 세포)를 선택합니다.
미세유체 소프트웨어에서 사용자 정의 시퀀스 실행 버튼을 클릭한 다음 2 PSI에서 10분 동안 응력 유도 배지를 주입한 다음 원하는 스트레스 처리 기간 동안 1 PSI에서 주입하도록 프로그래밍합니다. 투과광의 위상차와 필요한 경우 mCherry 신호에 대한 560나노미터 여기 광원을 사용하여 10분마다 한 프레임의 타임랩스 모드에서 현미경 이미징을 수행합니다. 현미경 이미지 획득과 미세유체 주입 프로토콜을 동시에 시작합니다.