0 조회수 • 3:05 분 • September 26th, 2025
박테리아 포자는 설탕과 아미노산의 중합체인 펩티도글리칸 피질층으로 인해 휴면 상태를 유지합니다.
발아하는 동안 피질은 분해되어 주변 매체로 당을 방출합니다.
피질 분해를 감지하려면 포자 발아 중 정의된 시점에서 수집된 방출된 당을 포함하는 배지부터 시작하십시오.
참조를 위해 설탕 표준물질의 농도를 증가시키십시오.
표준물질과 샘플은 당을 반응성 형태로 전환하기 위해 사전 처리를 거쳤습니다.
설탕과 반응하여 보라색 복합체를 형성하는 비색 검출 시약인 Ehrlich's reagent와 함께 배양합니다.
혼합물을 멀티웰 플레이트로 옮기고 마이크로플레이트 리더를 사용하여 착색 복합체의 흡광도를 측정합니다.
흡광도는 당 농도에 정비례하는 보라색 강도에 해당합니다.
시점 샘플에서 흡광도의 증가는 점진적인 피질 저하를 나타냅니다.
표준 농도에서 그래프를 생성하고 샘플 농도를 정량화합니다.
샘플이 얼음 위에 있는 동안 컬러 시약을 준비합니다. 0.320g의 DMAB를 빙초산 1.9밀리리터에 녹입니다. 이 시약은 시간, 온도 및 빛에 민감하므로 미리 만들어서는 안 됩니다.
DMAB가 완전히 용해된 후 100마이크로리터의 일반 염산 10개를 넣고 샘플을 소용돌이치게 합니다. 그런 다음 빙초산 5밀리리터를 넣고 다시 소용돌이치게 합니다. 비색 반응의 경우, 냉각된 각 피질 또는 대조군 샘플의 100마이크로리터를 새로운 1.5밀리리터 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
각 샘플에 새로 준비된 색소 용액 700마이크로리터를 첨가합니다. 즉시 샘플을 섭씨 37도의 수조로 옮기고 샘플을 정확히 20분 동안 배양합니다. 배양 후, 각 샘플 200마이크로리터를 투명한 96웰 플레이트로 옮깁니다.
샘플은 처음에는 노란색이어야 하지만 피질의 존재를 나타내는 환원당이 있으면 보라색으로 바뀝니다. 여기에서 많은 샘플이 눈에 보이는 보라색을 나타내지 않습니다. 그러나 250, 500 및 5,000 나노몰 샘플은 음성 대조군 제로 나노몰과 시각적으로 다르게 보입니다.
플레이트 리더를 사용하여 585나노미터에서 흡광도를 결정합니다. 585나노미터의 OD로 측정할 때 표준 샘플에서 생성된 신호는 선형 회귀에 가장 적합합니다.