0 조회수 • 2:50 분 • September 26th, 2025
소포 형성을 촉진하는 짧은 펩타이드인 소포 핵 펩타이드(VNp)로 태그된 재조합 단백질을 암호화하는 박테리아 종의 배양으로 시작합니다.
배양액에 유도제를 추가하고 배양합니다. 유도제는 단백질 발현을 유발합니다.
VNp는 내막에 내장되어 막 곡률을 촉진하여 VNp 태그 단백질을 발아 소포로 캡슐화합니다.
소포가 풍부한 배지를 튜브로 옮깁니다. 소포가 풍부한 상층액을 분리하기 위해 원심분리합니다.
그런 다음 상청액을 여과하여 잔류 오염 물질을 제거합니다.
그런 다음 여과액을 다른 멤브레인 필터에 통과시켜 멤브레인 표면의 소포를 포착합니다.
멤브레인을 접시에 넣고 인산염 완충 식염수를 첨가합니다.
소포를 부드럽게 분리하고 현탁액을 깨끗한 튜브로 옮깁니다.
현탁액을 초음파 처리하여 소포막을 파괴하고 단백질을 방출합니다.
용해물을 원심분리하여 멤브레인 조각을 분리합니다.
생성된 상청액에는 정제된 재조합 단백질이 포함되어 있어 분석이 가능합니다.
밀리리터당 최대 20마이크로그램 또는 84마이크로몰의 최종 농도로 IPTG를 첨가하여 T7 프로모터로부터 재조합 단백질 발현을 유도합니다. 유도를 위한 충분한 시간을 허용한 후, 3000g 및 섭씨 4도에서 20분 동안 원심분리하여 세포를 펠릿화합니다. 상청액을 멸균 및 세제가 없는 0.45미크론 PES 필터에 통과시켜 장기 보관을 위해 소포 함유 배지를 멸균합니다.
소포를 더 작은 부피로 농축하려면 배지가 포함된 멸균 소포를 멸균 및 세제가 없는 0.1미크론 MCE 필터에 통과시킵니다. 그런 다음 0.5-1밀리리터의 멸균 인산염 완충 식염수(PBS)로 멤브레인을 부드럽게 세척하고 세포 스크레이퍼 또는 플라스틱 스프레더를 사용하여 멤브레인에서 소포를 조심스럽게 제거합니다. 피펫을 사용하여 소포 농축액을 신선한 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
정제된 소포는 섭씨 4도에서 보관할 수 있습니다. 소포 지질 막을 파괴하고 단백질을 방출하기 위해 적절한 일정을 사용하여 멸균 배지에서 소포를 포함하는 단백질을 초음파 처리합니다. 초음파 처리된 현탁액을 섭씨 39,000g 및 섭씨 4도에서 20분 동안 원심분리하여 소포 파편을 제거합니다.