0 조회수 • 2:23 분 • September 26th, 2025
전자 공여체인 L-메티오닌, 산화환원 지시약인 니트로 블루 테트라졸륨 또는 NBT, 감광제인 플라빈 모노뉴클레오티드 또는 FMN을 포함하는 완충 반응 혼합물로 시작합니다.
이 혼합물을 박테리아 펠릿과 와류가 들어 있는 튜브에 첨가하십시오.
용액을 유리관에 옮깁니다.
이제 혼합물에 보라색 빛을 조사하여 FMN을 활성화하고, FMN은 L-메티오닌의 전자를 받아들여 반응성 중간체를 형성합니다.
이 중간체는 전자를 용존 분자 산소로 전달하여 박테리아 표면 근처에서 활성 산소종 또는 ROS를 생성합니다.
그 결과 ROS는 세포 구성 요소를 손상시키고 박테리아 생존력을 감소시킵니다.
ROS는 또한 NBT를 박테리아 표면 근처에 침전되는 파란색 제품인 포르마잔으로 환원시킵니다.
혼합물을 튜브로 옮기고 원심분리한 다음 상청액을 버립니다.
펠릿을 유기 용매에 재현탁하여 포르마잔을 가용화합니다.
마지막으로 흡광도를 측정하여 ROS 생성을 통한 빛 유도 박테리아 불활성화를 결정합니다.
세포 펠릿을 얻기 위해 앞서 설명한 대로 황색포도상구 균 샘플을 준비합니다. 인산염 완충액 75밀리리터에 L-메티오닌 0.1093g, NBT 0.1g, FMN 용액 25밀리리터를 첨가합니다.
다양한 FMN 농도를 가진 각 반응물 용액 1밀리리터를 세포 펠릿과 와류에 첨가합니다. 제곱미터당 10와트의 보라색 빛 아래에서 용액을 10분 동안 조사합니다. 혼합물을 14,000G에서 10분 동안 원심분리하고 상청액을 디캔팅합니다.
환원된 NBT를 추출하기 위해 1밀리리터의 디메틸 설폭사이드에 펠릿을 재현탁합니다. 560나노미터에서 흡광도를 기록합니다.