혐기성 조건에서 생체 이용 가능한 수은을 검출하기 위한 박테리아 바이오센서 분석

0 조회수4:26 • October 30th, 2025

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혐기성 챔버 내부에 배치된 바이알이 포함된 분석 설정으로 시작합니다.

각 바이알에는 질산나트륨, 수은 이온 및 다양한 농도의 황산마그네슘이 보충된 배지가 들어 있습니다.

설정을 회전시켜 성분을 혼합한 다음 배양합니다.

배양하는 동안 황산마그네슘은 생체 이용 불가능한 수은 복합체의 형성을 촉진하여 농도 의존적 방식으로 유리 생체 이용 수은 이온을 감소시킵니다.

다음으로, 플라스미드를 운반하는 유전자 조작 박테리아인 유도 바이오센서를 추가하고 혼합합니다.

플라스미드는 수은 반응성 전사 조절자 및 형광 리포터 유전자에 연결된 프로모터를 포함합니다.

혐기성 조건에서 박테리아는 호흡을 위해 질산염을 활용합니다.

유리 수은 이온이 세포에 들어가 전사 조절인자와 결합하고 형광 유전자를 활성화하여 형광 단백질을 생성합니다.

각 바이알의 분취량을 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.

플레이트 리더를 사용하여 형광 강도를 측정합니다.

황산마그네슘 농도가 증가함에 따라 형광이 감소하면 생체 이용 가능한 수은의 변화를 감지하는 바이오센서의 능력이 확인됩니다.

실험을 시작하기 전에 혐기성 모니터를 점검하여 혐기성 챔버에 산소가 없는지 확인하십시오. 96웰 템플릿에 따라 플레이트 레이아웃을 설계합니다. 3개의 기술적 반복으로 실험을 실행하려면 32개의 서로 다른 처리가 가능하며, 이는 바이알을 설정하기 위한 4x8 그리드로 가장 잘 표현됩니다.

분석 플레이트 레이아웃에 따라 4x8 그리드를 설정합니다. 그런 다음 7밀리리터 PTFE 표준 바이알을 트레이에 넣습니다. 바이알은 바이알 외부를 조작해야만 취급해야 합니다.

각 처리에 해당하는 각 바이알에 노출 매체 부피를 추가합니다. 각 바이알에 플레이트 레이아웃에 따라 테스트할 화학 변수의 해당 부피를 추가합니다. 이제 최종 농도가 200마이크로몰이 되도록 각 바이알에 질산염을 첨가합니다.

구성적 바이오센서 처리 블랭크에 대해서는 이 단계를 제외합니다.

 

바이알에 수은을 추가하려면 먼저 4-8마이크로몰 스톡을 가져다가 잘 흔듭니다. 용액과 노출 매체를 7밀리리터 PTFE 바이알에 100-250나노몰의 농도로 희석하여 작동하는 수은 용액을 만듭니다.

이 작업 용액에서 플레이트 레이아웃에 따라 필요한 바이알에 수은을 추가합니다. 수은 또는 카드뮴을 첨가한 후 궤도 운동으로 플레이트를 수동으로 흔듭니다. 실험은 수은 또는 카드뮴이 용액에서 종분화하는 데 필요한 시간에 따라 지금 일시 중지될 수 있습니다.

실험이 재개되면 균질성을 보장하기 위해 바이오센서 스톡을 앞뒤로 부드럽게 피펫팅합니다. 그런 다음 각 바이알에 100마이크로리터의 바이오센서 스톡을 추가하고 이전과 같이 플레이트를 수동으로 흔듭니다. 플레이트 리더를 섭씨 37도로 예열하고 2점 5분에서 5분마다 판독하여 10시간 동안 키네틱 런을 설정합니다.

판독 사이의 궤도 흔들림은 440나노미터의 형광 여기와 500나노미터의 방출로 형광 측정을 수행하도록 실행을 설정합니다. 이제 4 x 8 그리드의 각 PTFE 바이알에서 200마이크로리터를 96웰 플레이트의 해당 웰에 피펫팅합니다.

각각 200마이크로리터를 옮기기 전에 앞뒤로 5번 피펫팅합니다. 96웰 플레이트를 플레이트 리더의 트레이에 놓습니다. 그런 다음 96웰 플레이트에 뚜껑을 덮고 분석을 시작합니다.

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마지막 업데이트: 15 8월 2026