JoVE 실험 백과사전
미생물학
0 조회수 • 2:04 분 • October 30th, 2025
차가운 완충액에 현탁된 야생형 Dictyostelium discoideum 아메바 세포로 시작합니다.
완충액은 멤브레인 안정성을 유지하는 이온 환경을 제공합니다.
다음으로, 표적 유전자가 있는 플라스미드가 들어 있는 튜브에 아메바 세포를 추가합니다.
용액을 부드럽게 혼합하여 플라스미드가 아메바 표면에 밀착되도록 합니다.
이 혼합물을 미리 냉각된 전기천공 큐벳으로 옮기고 전기천공을 수행합니다.
전기천공 중에 전기 펄스는 세포막에 일시적인 기공을 생성합니다.
플라스미드는 이러한 기공을 통해 세포질로 들어간 후 핵으로 이동합니다.
다음으로, 아메바 세포를 피더 박테리아가 보충된 액체 배지가 들어 있는 페트리 접시로 옮깁니다.
아메바는 식균 작용을 통해 박테리아를 소비하여 세포 회복에 필수적인 영양소를 제공하고 플라스미드 발현을 가능하게 합니다.
피더 박테리아는 박테리아 없이 자라는 특수 균주 없이 야생형 아메바 세포의 형질감염을 지원합니다.
세포를 H40 완충액에 재현탁합니다.
다음으로, 1-2마이크로그램의 DNA가 들어 있는 튜브에 100마이크로리터의 세포를 추가합니다. 위아래로 피펫팅하여 세포 DNA 혼합물을 혼합하고 사전 냉각된 전기천공 큐벳으로 옮깁니다.
2마이크로그램 이상의 DNA를 첨가하지 마십시오. DNA 농도가 높을수록 세포에 독성이 있고 효율성이 저하됩니다.
전기천공 후 즉시 세포를 준비된 10cm 페트리 접시로 옮기고 세포가 5시간 동안 회복되도록 합니다.