인간 노로바이러스의 박테리아 유래 재조합 P 도메인 단백질의 정제

JoVE Encyclopedia of Experiments

미생물학

0 조회수 • 2:01 분 • October 30th, 2025

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다공성 구형 젤 비드로 채워진 크기 배제 크로마토그래피 컬럼을 가져 와십시오.

분리 중에 단백질의 구조적 무결성을 보존하는 완충액으로 컬럼을 평형화합니다.

재조합 발현된 인간 노로바이러스 P 도메인 단백질과 잔류 단백질 불순물을 포함하는 정제된 박테리아 추출물을 로드합니다.

컬럼을 통해 샘플을 구동하기 위해 버퍼를 추가합니다.

큰 잔류 불순물은 기공으로 들어가 비드 사이의 공간을 통과하지 못하여 먼저 용출됩니다.

UV 흡광도를 사용하여 용출을 모니터링합니다. 작은 피크는 컬럼에서 불순물이 빠져나오는 것을 나타냅니다.

대조적으로, 작은 P 도메인 단백질은 비드 기공으로 들어가 더 긴 경로를 이동하고 나중에 용리됩니다. 흡광도 피크의 상승은 P 도메인 단백질의 용출을 나타냅니다.

이제 추가 분석을 위해 준비된 P 도메인 단백질을 포함하는 용출된 분획을 수집합니다.

고성능 액체 크로마토그래피 정제 시스템의 펌프와 파이프를 세척하고 겔 여과 완충액으로 크기 배제 크로마토그래피 컬럼을 사전 평형화합니다. 농축된 샘플의 부피에 따라 슈퍼루프 또는 루프를 사용하여 분당 1밀리리터의 유속으로 P 도메인을 컬럼에 주입합니다. 주입이 끝나면 유속을 분당 2.5밀리리터로 늘립니다.

광학 밀도가 증가하고 P 도메인이 컬럼에서 떨어지면 1.5밀리리터의 분획을 수집합니다. P 도메인은 일반적으로 이량체로 용출됩니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026