금속 반응성 유전자의 역할을 연구하기 위한 금속 제한 박테리아 성장 분석

야생형 박테리아와 야생형에 존재하는 특정 금속 반응 유전자가 없는 돌연변이 박테리아를 예로 들어 보겠습니다.

박테리아는 내부 금속 비축량을 소진하기 위해 금속이 고갈된 매체에서 성장합니다.

이 금속이 고갈된 환경에서는 야생형 박테리아의 금속 반응 유전자가 활성화되어 돌연변이 박테리아에는 없는 표면 수용체를 발현합니다.

균일한 세포 밀도를 보장하기 위해 배양액을 희석합니다.

금속-단백질 복합체가 포함된 멀티웰 플레이트를 가져 가십시오.

희석된 배양액을 우물에 첨가하십시오.

최적의 박테리아 성장을 촉진하기 위해 쉐이크하면서 제어된 온도로 유지되는 플레이트 리더 내부에서 플레이트를 배양합니다.

시간 경과에 따른 박테리아 성장을 모니터링하기 위해 정기적으로 흡광도를 측정합니다.

야생형 박테리아에서 금속 수용체는 복합체에서 금속 이온을 추출하여 성장을 지원합니다.

돌연변이 박테리아는 금속 수용체 없이 복합체에서 금속 이온을 추출하지 못하기 때문에 제한된 성장을 보입니다.

10 마이크로리터의 10X 프리믹스와 90 마이크로리터의 CDM을 블랭크 컨트롤을 위해 3개의 웰 각각에 추가합니다.

사이드 암 플라스크의 배양액이 두 배가 되면 마이크로플레이트의 사용하지 않는 웰에 각 배양액 100마이크로리터를 추가하고 600나노미터에서 광학 밀도를 측정합니다.

배양물을 600나노미터에서 0.02의 광학 밀도로 만드는 데 필요한 정확한 희석량을 계산한 후, 작은 배양 튜브에서 CDM으로 배양액을 희석하고 플레이트에서 10X 프리믹스를 1X로 희석할 수 있는 충분한 부피를 추가합니다.

그런 다음 플레이트를 플레이트 리더에 8-12시간 동안 흔들면서 원하는 실험 간격으로 600나노미터 판독값에서 광학 밀도를 얻습니다.