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미생물학
0 조회수 • 2:51 분 • October 30th, 2025
인간 호흡기 병원체인 유형 불가능한 헤모필루스 인플루엔자 균주부터 시작합니다.
박테리아 배양액을 영양이 풍부한 선택적 배지에 줄무늬로 옮기고 CO2가 풍부한 조건에서 배양하여 호흡기 환경을 모방합니다.
배양하는 동안 박테리아는 영양분을 활용하고 증식하여 콜로니를 형성합니다.
콜로니를 선택적 액체 배지로 옮기고 배양하여 액체 배양에서 박테리아 성장을 촉진합니다.
분취량을 미세 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
원심분리하여 박테리아를 분리하고 상청액을 버립니다.
박테리아를 완충액에 재현탁하고 다시 원심분리하여 박테리아를 세척 및 분리한 다음 잔류 배지 함유 상청액을 버립니다.
박테리아를 완충액에 재현탁하고 희석합니다.
분광 광도계를 사용하여 600nm에서 광학 밀도를 측정하여 박테리아 농도를 추정합니다.
희석된 박테리아 배양액을 선택적 배지에 도금하고 배양하여 콜로니를 형성합니다.
콜로니를 계산하여 나중에 사용할 수 있도록 접종물을 준비하기 위한 콜로니 형성 단위를 계산합니다.
초콜릿 한천 접시에 NTHI를 접시에 담습니다. 플레이트를 섭씨 37도에서 5% 이산화탄소와 함께 밤새 거꾸로 배양합니다. 다음날, 뇌-심장 주입 국물에서 박테리아를 배양합니다.
그런 다음 미세 원심분리기 튜브에 국물 1밀리리터를 추가합니다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 4,000g으로 돌립니다. 그런 다음 상청액을 버리고 펠릿을 PBS 1밀리리터에 재현탁합니다. 이 세탁 단계를 한 번 더 반복합니다.
다음으로, 100마이크로리터의 재현탁 용액을 900마이크로리터의 PBS에 희석하고 600나노미터에서 배양액의 흡광도를 측정합니다. 이 정보를 사용하여 접종물을 밀리리터당 2천만 CFU로 조정합니다.
다음으로, 접종물의 생존력과 CFU를 결정합니다. 초콜릿 한천 접시에 국물을 1-10회 연속 희석하여 배양하고 밤새 배양합니다.