0 조회수 • 2:17 분 • October 30th, 2025
기관이 노출된 안락사된 마우스로 시작하십시오. 쥐의 폐는 병원성 박테리아인 유형화할 수 없는 헤모필루스 인플루엔자e에 사전 감염되었습니다.
카테터를 기관에 삽입하고 세척 완충액으로 채워진 주사기에 부착합니다.
혈전 형성을 방지하기 위한 항응고제와 세포 무결성을 보존하기 위한 설탕이 포함된 세척 완충액을 투여합니다.
적혈구, 면역 세포 및 잔류 병원균이 포함된 기관지폐포 세척액을 회수하기 위해 부드럽게 흡인합니다.
절차를 반복하고 회수된 세척액을 단일 현탁액으로 모으십시오.
풀링된 현탁액에서 분취량을 취하고 원심분리하여 세포를 분리합니다. 상청액을 버리십시오.
세포를 용해 완충액에 재현탁하여 적혈구를 선택적으로 용해합니다.
원심분리하여 나머지 세포를 분리하고 잔해물이 포함된 상청액을 버립니다.
나머지 세포를 완충액에 재현탁합니다.
면역 세포와 잔류 박테리아를 포함하는 최종 현탁액은 다운스트림 분석을 위해 준비되었습니다.
기관에 접근하기 위해 폐의 복부 부분을 노출시킵니다. 20게이지 카테터로 기관을 삽관합니다.
카테터를 사용하여 0.8ml의 BALF 완충액을 주입하고 치과 흡인으로 세척액을 수집합니다. 이 절차를 세 번 더 반복하여 4개의 세척 컬렉션을 단일 현탁액으로 모으십시오.
100마이크로리터 분취량을 2,000RPM에서 2분 동안 회전시킵니다.
상청액을 제거하고 RBC 용해 완충액에 재현탁합니다. 그것을 아래로 돌리고 1X PBS로 펠릿을 재현탁합니다.