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미생물학
0 조회수 • 3:17 분 • October 30th, 2025
티오황산염이 보충된 영양이 풍부한 한천 플레이트로 시작하십시오.
시아노박테리아를 줄무늬로 만들고 일주기 주기를 유지하기 위해 밝은 기간과 어두운 기간을 번갈아 가며 배양합니다.
빛이 있는 기간 동안 영양분 흡수와 티오황산염은 박테리아 성장과 DNA 응축을 지원합니다.
암흑기에는 세포가 에너지를 보존하고 분열합니다.
교대 명암 주기는 세포를 동일한 성장 및 분열 단계에 동기화합니다.
빛이 지난 후 자당 용액과 피펫을 반복적으로 첨가하여 시아노박테리아를 방출하여 색상 변화를 일으킵니다. 세포를 튜브로 옮깁니다.
DNA 특이적 형광 염료를 첨가하고 어둠 속에서 배양합니다. 염료는 시아노박테리아 DNA에 결합합니다.
원심분리하여 시아노박테리아를 분리하고 상청액을 제거합니다.
시아노박테리아를 자당 용액에 재현탁하고 현탁액을 슬라이드로 옮기고 덮습니다.
형광 현미경에서 세포의 파란색 응축 DNA는 시아노박테리아 세포 주기의 동기화된 일주기 조절 진행을 확인합니다.
1.5% 한천과 0.3% 티오황산나트륨을 함유한 9cm 길이의 멸균된 BG-11 플레이트에서 시아노박테리아를 성장시키는 것으로 시작합니다. 초당 평방 미터당 50 micro-E의 빛으로 12-12 빛 주기 하에 섭씨 23도에서 플레이트를 배양합니다. 세포를 유지하려면 매주 신선한 BG-11 한천 플레이트에 옮깁니다.
일주일 이내에 문화는 녹색 띠로 나타납니다. 화염 멸균 루프를 사용하여 녹색 세포 덩어리를 옮기고 새 플레이트에 줄무늬를 그립니다. DNA 압축을 관찰하려면 빛의 기간이 끝날 때 6일 동안 배양된 세포를 수집합니다.
플레이트에서 세포를 방출하려면 0.2몰 자당 1밀리리터를 추가합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 수집하고 용액이 녹색으로 변할 때까지 자당 첨가 및 제거를 반복합니다. 색상 변화는 대부분의 세포가 해제되었음을 나타냅니다.
이제 500마이크로리터의 부유 세포 용액을 Microfuge 튜브에 옮기고 Hoechst 염색을 첨가하여 밀리리터당 1마이크로그램의 최종 농도를 얻습니다. 그런 다음 세포를 어두운 곳에서 10분 동안 배양합니다. 다음으로, 세포를 회전시키고 상청액을 버리고 10마이크로리터의 0.2몰 자당에 재현탁합니다.
다음으로, 현탁액 1마이크로리터를 슬라이드 유리판에 옮기고 커버 슬립을 씌운 다음 UV 필터가 장착된 형광 현미경으로 세포를 관찰합니다. 100배 오일 침지 대물렌즈를 사용하여 대부분의 세포에서 관찰할 수 있는 DNA 압축의 증거를 찾습니다.