JoVE 실험 백과사전
미생물학
0 조회수 • 2:44 분 • October 30th, 2025
막 단백질-나노 지단백질 입자의 단백질 밴드를 포함하는 SDS-PAGE 겔을 섭취합니다. 이 복합체는 클라미디아 감염에 대한 유망한 백신 항원인 클라미디아 올리고머 막 단백질 또는 MP를 운반합니다.
정제된 올리고머 MP의 단백질 밴드를 대조군으로 사용합니다.
젤, 웨스턴 블롯 멤브레인 및 블로팅 구성 요소를 건식 블로팅 시스템에 조립합니다.
전류를 가하여 분해된 단백질을 멤브레인으로 전달합니다.
멤브레인을 제거하고 세제와 1차 항체가 들어 있는 완충액에서 배양합니다.
세제는 비특이적 상호 작용 부위를 차단하는 반면 1차 항체는 MP를 표적으로 합니다.
멤브레인을 세척하여 결합되지 않은 1차 항체를 제거합니다.
1차 항체를 표적으로 하는 형광단 접합 2차 항체와 함께 배양합니다.
멤브레인을 세척하여 과도한 2차 항체를 제거합니다.
멤브레인의 형광 이미지를 캡처합니다.
대조군 올리고머 MP와 일치하는 분자 밴드는 복합체 내에서 MP의 구조적 무결성을 확인하여 항원 가능성을 지원합니다.
SDS-PAGE로 샘플을 분리하고 웨스턴 블롯 분석을 위한 상업용 드라이 블로팅 시스템을 사용하여 겔 스택을 옮깁니다. 스택에서 블롯을 제거하고 델타-49ApoA1 단백질의 HIS 태그에 대한 0.2% TWEEN 20 및 0.5 마이크로그램/밀리리터 MAb40 또는 0.2 마이크로그램/밀리리터 MAbHIS 항 HIS 항 HIS 항체 항체를 포함하는 차단 완충액에서 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다.
각 블롯을 PBST로 세척당 5분 동안 세 번 세척합니다. 1 내지 10,000의 희석액으로 형광단에 접합된 2차 항체를 포함하는 차단 완충액에서 블롯을 1시간 동안 배양합니다. PBST로 세척을 반복하고 최종 세척 후 형광 이미저를 사용하여 이미지를 캡처합니다.