0 조회수 • 3:54 분 • October 30th, 2025
광합성 박테리아인 시아노박테리아 배양으로 시작하십시오.
이 박테리아는 지질이 풍부한 장소구 방울과 틸라코이드 막을 포함하며, 이는 광합성 색소가 풍부한 접힌 막 구조입니다.
배양액을 원심분리하고 상청액을 버려 박테리아가 생성한 세포외 다당류를 제거합니다. 펠릿을 세척한 다음 완충액에 재현탁합니다.
고압 균질화기를 사용하여 전단력을 생성하여 세포벽과 막을 파괴합니다.
틸라코이드 막의 파열은 광합성 색소를 용해물로 방출합니다. 색소 방출은 세포 파괴 및 플라스토소블 방출을 나타내는 색상 변화를 일으킵니다.
용해물을 원심분리기 튜브에 넣은 다음 자당 용액을 첨가하여 밀도 구배를 형성합니다.
원심분리하여 밀도에 따라 세포 성분을 분리합니다.
틸라코이드 및 기타 무거운 성분은 바닥에서 펠릿화되는 반면, 저밀도 편성소구는 뚜렷한 띠로 상단에 떠 있습니다.
성형소구 분획을 수집하고 추가 분석을 위해 냉동하여 보관합니다.
50밀리리터의 시네코시스티스 종 PCC 6802 배양액을 BG11 배지에서 7-10일 동안 성장시켜 고정기에 도달합니다.
분광 광도계를 사용하여 셀 밀도를 750나노미터에서 광학 밀도 2.0으로 조정합니다. 다당류를 제거하려면 배양물 50밀리리터를 원심분리하고 상청액을 제거합니다. 50밀리리터의 완충액 A에서 세포를 두 번 세척하는 것을 반복합니다.
세척된 펠릿을 25밀리리터의 완충액 A에 재현탁하고 1,100파운드 평방인치에서 프렌치 압력 셀을 사용하여 세포를 부수십시오. 백색광 아래에서 용해된 색상이 녹색에서 빨간색-파란색-녹색으로 변할 때까지 추운 조건에서 이 과정을 세 번 반복합니다. 세포 균질체의 분취량을 제거하고 대표적인 총 세포 샘플로 저장하기 위해 따로 보관합니다.
생성된 균질을 각 튜브에 최대 2.5밀리리터까지 채워진 8개의 3밀리리터 초원심분리기 튜브에 분배합니다. 이 균질체를 400마이크로리터의 중간 R과 겹쳐서 스텝 구배를 생성합니다. 튜브를 원심분리하기 전에 필요에 따라 배지 R을 추가하여 튜브의 균형을 조심스럽게 맞추십시오.
폴리하이드록시알카노에이트 몸체를 포함한 틸라코이드 및 기타 더 무거운 소기관은 펠릿 형성을 나타내는 반면, 플라스토소블은 자당 구배의 상단 또는 그 근처에 노란색 유성 패드를 형성합니다. 주사기로 생성된 조한 편성소구의 부유 패드를 수확하고 수확물을 2밀리리터 튜브에 넣습니다.
필요한 경우 바늘 끝으로 초원심분리기 튜브 벽의 측면에서 플라스토소블을 긁어냅니다. 시아노박테리아 처리를 계속하거나 조잡한 플라스토글로불을 섭씨 영하 80도에 보관하고 나중에 정제하십시오.