0 조회수 • 2:03 분 • October 30th, 2025
병원성 박테리아인 레지오넬라 뉴모필라 배양으로 시작하십시오.
이 박테리아 세포는 숙주 감염에 필수적인 막에 분비 시스템을 가지고 있습니다.
박테리아 세포를 멸균수에 현탁시켜 극저온 전자 단층 촬영(cryo-ET) 이미징에 필요한 밀도를 달성합니다.
3차원 재구성 중 이미지 정렬을 위한 기준점 역할을 하는 금 나노입자를 추가합니다.
박테리아 샘플을 침전시키기 위해 천공된 탄소막이 있는 그리드를 가져 가십시오.
그리드를 가스로 채워진 챔버 안에 놓고 방전을 가하여 표면을 더 친수성으로 만듭니다.
현탁액을 그리드에 도포하여 액체가 표면에 균일하게 퍼지고 세포가 가라앉도록 합니다.
그리드에서 과도한 물을 제거하고 액체 동결 매체에 담그면 샘플을 동결하고 세포 구조가 보존됩니다.
이제 샘플은 박테리아 분비 시스템의 cryo-ET 이미징을 위한 준비가 되었습니다.
전자 냉동 단층 촬영 샘플을 준비하려면 섭씨 37도에서 48시간 동안 CYE-한천-스트렙토마이신 플레이트에서 레 지오넬라 뉴모필라 의 무거운 패치를 성장시킵니다.
세포를 물에 약 0.7의 OD600 으로 재현탁합니다. 그런 다음 5마이크로리터의 콜로이드 금 입자를 20마이크로리터의 세포 현탁액에 첨가합니다. 글로우는 구멍이 뚫린 탄소 그리드를 배출하고 그 위에 5마이크로리터의 세포 혼합물을 피펫팅합니다.
1분 동안 그대로 두십시오. 그리드를 여과지로 닦아내고 중력 구동 플런저 장치를 사용하여 액체 에탄에 얼립니다.