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미생물학
0 조회수 • 2:48 분 • October 30th, 2025
빠르게 자라는 박테리아인 비브리오 내트리겐 배양균이 들어 있는 튜브를 가져가십시오.
배양물을 원심분리하여 박테리아를 펠릿화합니다. 잔류 배지가 포함된 상청액을 버립니다.
박테리아 펠릿을 신선한 배지에 재현탁하고 박테리아 배양 준비를 위해 동일한 배지가 들어 있는 원추형 플라스크로 옮깁니다.
폭기 조건에서 흔들어 배양액을 배양합니다.
생성 시간이 짧기 때문에 비브리오 자연 균은 영양분을 활용하고 빠르게 분열하여 집중된 박테리아 개체군을 생성합니다.
분광 광도계를 사용하여 광학 밀도(OD)를 정기적으로 모니터링하여 박테리아 농도를 결정합니다.
OD가 약 1에 도달할 때까지 배양을 성장시키며, 이는 높은 대사 활동을 가진 기하급수적인 성장 단계를 나타냅니다.
배양액을 원심분리기 튜브로 옮깁니다.
저온에서 원심분리하여 세포 무결성을 유지하면서 박테리아를 분리합니다.
튜브를 얼음 위에 놓고 세포 파편이 포함된 상청액을 제거합니다.
다운스트림 분석을 위해 박테리아 펠릿을 초저온에서 보관합니다.
시작하려면 하룻밤 비 브리오 내트리겐스 배양액 1밀리리터를 벤치탑 원심분리기에서 10,600배 g으로 1분 동안 원심분리하여 세척합니다.
펠릿을 방해하지 않고 상청액을 흡인하고 신선한 LB-V2 배지 1밀리리터에 재현탁합니다. 멸균 덮개가 있는 고압멸균된 4리터 배플 삼각 플라스크에 세척된 하룻밤 배양액 1밀리리터를 신선한 LB-V2 성장 배지 1리터에 접종하여 1 대 1,000 희석 비율을 달성합니다. 섭씨 30도에서 225RPM으로 흔들면서 배양액을 성장시킵니다.
분광 광도계를 사용하여 배양액의 OD 600을 모니터링하고 1.0 플러스 또는 마이너스 0.2에 도달하면 2개의 500밀리리터 튜브에 3,500배 g으로 섭씨 4도에서 20분 동안 원심분리하여 배양액을 수확한 다음 얼음 위에 놓습니다. 상청액을 흡인하고 즉시 펠릿을 처리합니다.