Name: 마우스의 모델링 스트로크 - 필라멘트 모델 중간 대뇌 동맥 폐색 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-06T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: 학습하세요 마우스 뇌경색 모델링을 위한 중대뇌동맥 폐색술로, 필라멘트를 이용한 최소침습적 기법입니다. 이 방법은 허혈성 뇌졸중의 신경학적 결손을 연구하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

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이 작품은 부여 계약 N ° 201024과 N ° 202,213 (유럽 스트로크 네트워크)에서 유럽 공동체의 7 번째 프레임 워크 프로그램 (FP7/2007-2013)에 의해 재정 지원되었다. 추가 자금은 Bundesministerium FÜR Bildung 놀이 Forschung (행정 연구 베를린 센터)와 독일 Forschungsgemeinschaft (Exzellenzcluster NEUROCURE)에 의해 주어졌다. 저자는 애니메이션 제작을위한 운영 및 엘크 루드비히 (샤히떼 비디오 서비스) 동안 지원 Mareike 티엘크을 (실험적 신경과에 대한 Dep., 샤히떼 베를린) 감사드립니다.

높은 품질과 재현성을 보장하기 위해, 우리는 표준 운영 절차 (SOP)의 사용을 권장합니다. 이 비디오에서는, 같은 연구실에서 개발하고 사용하는 출판 솝스이 적용됩니다 1. 1. 중간 대뇌 동맥 폐색 <ol><li> 마우스는 수의 직원들과 상담에 적절한 마취 정권과 anaesthetized 있습니다. (1.5 예를 들어 유도 - 1.0 2% Isoflurane 및 유지 보수 - 3분의 2 N2O와 기화기를 사용하여 3분의 1 O2에서 Isoflurane 1.5 %). <ol><li> 생쥐의 체온은 36.5 ° C에서 ± 0.5 ° C 열판과 함께 수술하는 동안 유지됩니다. 마우스의 직장 온도에 따라 체온이 피드백 제어 가열 패드는, 매우 좋습니다. </li><li> 적절한 에이전트 (예 : 70% 에틸 알코올)과 피부와 주변 모피를 소독하고 나중에 그것을 건조. </li></ol></li><li> 정중선 목 절개가 만들어이며, 부드러운 조직은 따로 뽑아 있습니다. </li><li> 왼쪽 일반 경동맥 (LCCA)는 신중하게 주변 신경 (vagal 신경을 해치지 않고) 및 묶인이 6.0/7.0 문자열을 사용하여 만든에서 무료로 해부하는 것입니다. 5.0 문자열도 사용할 수 있습니다. </li><li> 왼쪽 외부 경동맥의 동맥 (LECA)는 다음 구분하고 두 번째 매듭이 이루어집니다. </li><li> 다음, 왼쪽 내부 경동맥의 동맥 (LICA)는 고립되고 매듭은 6.0 필라멘트와 준비가되어 있습니다. </li><li> 왼쪽 내부 경동맥의 동맥 (LICA)과 왼쪽 pterygopalatine 동맥 (LPA)의 좋은 경치를 취득 후, 두 동맥은 microvascular 클립을 사용하여 잘린 있습니다. </li><li> 그것은 LECA과 LICA에 bifurcates 전에 작은 구멍이 LCCA에서 절단합니다. 그것은 클립에서 멈출 때까지 실리콘 경화제 혼합물 (아래 참조)과 코팅 8.0 나일론으로 만든 monofilament는 다음 LICA에 소개됩니다. 관심은 후두 동맥을 입력하지 지불되어야합니다. (그림 1) </li><li> 필라멘트는 윌리스의 원안에 LMCA의 기원을 막다하는 LICA에 삽입되는 동안 잘린 동맥이 열립니다. </li><li> LICA에 세 번째 매듭은 위치에 필라멘트를 해결하기 위해 닫힙니다. </li><li> 마우스는 볼륨 보충으로 subcutaneously 호수 0.5 ML를 받게됩니다. 통증의 경우, Lidocaine 젤은 몸에 붙이기도 상처에 적용됩니다. </li><li> reperfusion가 의도하는 경우, 마우스가 30 숙박 - 온수 케이지 90 분 폐색, 상처는 작은 봉합 클립과 함께 폐쇄 수 있습니다. 이후, 두 번째 마취가 수행, ICA에서 세 번째 매듭이 순간 열리고 필라멘트가 철회됩니다. </li><li> 나머지 봉합이 짧아되고 피부는 수술 치료와 적응합니다. </li><li> 모든 동물은 위에서 설명한대로 두 번째 볼륨 보충을 받게됩니다. </li><li> 동물은 체온의 제어 두 시간 동안 열띤 새장에 넣어 있습니다. <ol><li> 동물 불편의 흔적에 대한 수술 후 매일 점검해야합니다. 마우스 일부 게시물 외과 체중 감량을 보여줄 수 있어요. 그들은 먹는 장려하는 바닥에 놓인 배양 - 접시에 으깬 음식을받을 수 있습니다. 음식 7 일 동안 매일 바뀝니다. </li></ol></li></ol> 2. 섐 운영 <ol><li> 가짜 작업에 필라멘트가 LMCA을 막다에 삽입 및 인스턴트 reperfusion (1.8)을 허용하는 즉시 철회합니다. 두 번째 마취를 포함하여 - 후속 작업 대뇌 ischaemia (1.14 1.9)를받은 동물에서 수행되는 동일합니다. </li></ol> 3. 필라멘트의 준비 <ol><li> 필라멘트의 불임을 고려하여야한다. 멸균 장비뿐만 아니라 필라멘트의 적절한 처리의 사용은 나중에 불임 수술을위한 필수 조건이다. 일반적인 살균 방법의 많은 필라멘트의 품질을 악화시킬 수 있으므로 필라멘트의 소독은 어렵습니다. 그러나 이러한 방사선으로 방법, 자외선 또는 γ 선, 또는 화학 살균과 함께 예를 들어, 산화 에틸렌과 같은 반응성이 매우 높은 가스와 예를 들어, 적용됩니다. </li><li> 8.0 나일론 필라멘트는 현미경으로 11mm의 길이로 절단됩니다 </li><li> 필라멘트 팁은 Xantopren M 점막 및 활성 NF Optosil의 경화제의 혼합 8 mm의 길이를 통해 완전히 고르게 코팅되어야합니다 </li></ol> 4. 대표 결과 다른 모터와 행동 적자의 결과, 혈액 흐름 제한의 기간에 따라 다릅니다. 모두 30 뇌성 ischaemia 60 분, 이후 대부분의 경우 동물 측면 밀어 감소 저항을 표시하고 운동의 방해로 인해 돌고. 전면 리에서 flexor 위치로 Milder 병변 명단MBS. 이 쉽게 관찰할 표지판이 작전의 성공을위한 기본 점수로 사용할 수 있습니다. 2 Morphologically 병변은 조직학 또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 평가하실 수 있습니다. ischaemia 30 분 striatum에 한정 주로의 연결을 세포 사망의 원인 반면, 중간 대뇌 동맥의 폐색 60 분이 striatum과 네크로 텍스 모두 포함하는 영역에서 조직 pannecrosis을 생산하고 있습니다. 3 (그림 2)를 경색 볼륨 측면에서, 우리는 기대 운영 일련의 30 %보다 낮은 표준 편차. 60 분 후 20 % - 사망률은 ischaemia 10 30 분 후에 약 5 % 폐색 시간에 따라 달라집니다. 또 최소한의 침입 가능성은 성공의 직접적인 제어를 허용하는 작업 동안 레이저 도플러 flowmetry (LDF)의 사용이다. 개별 동물에서 10 감소 - preocclusion 값의 20 %가 명확하게 초점 대뇌 국소 빈혈의 성공적인 유도를 나타내는 4가 그러나, LDF는 interindividual 비교하는 방법으로 사용할 수 없습니다 LDF는 혈액의 양적 변화 (백분율)를 측정할 수 있기 때문입니다. 작고 제한된 조직 샘플 볼륨 내에서 흐름. 그것은 혈류 감소의 공간적 범위에 대한 정보를 제공하지 않습니다 5. 보행 분석 6,7, Rotarod 8, 폴 테스트 9,10, 접착제 제거 시험 11,12, 계단 테스트 13,14, 래더 렁 테스트 15,16와 모리스 물 미로를 포함하여 뇌졸중 후 행동 측면을 평가하기 위해 몇 가지 테스트가 있습니다 17. 모든 테스트에서, MCAo를 받게 쥐가 덜 성공적으로 제어 동물보다 수행합니다. <img src="/files/ftp_upload/2423/2423fig1.jpg" alt="그림 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"> 그림 1. 마우스의 뇌 (배경에 묘사된) 제공하는 선박의 건축 계획. 다른 변종은 유사 나타날 수 있습니다, 예를 들어 후두 동맥 때로는 내부 경동맥에서 떠납니다. <img src="/files/ftp_upload/2423/2423fig2.jpg" alt="그림 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"> 그림 2. 근위 MCAo 모델에 reperfusion의 다른 시간 지점 이후에 전형적인 병변 크기의 도식 그림. 중간에 기능 활동 MCAo 후 대뇌 혈류의 전형적인 코스는 그려져 있습니다. (MCAo : 중간 대뇌 동맥 폐색, LDF : 레이저 도플러 유량 측정)

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<li>Meisel, C., Schwab, J. M., Prass, K., Meisel, A., Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+nervous+system+injury-induced+immune+deficiency+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Central nervous system injury-induced immune deficiency syndrome.</a> Nat Rev Neurosci. 6, 775-786 (2005).</li>
<li>Engel, O., Meisel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+Infection+Before+and+After+Stroke%3A+Investigating+New+Targets%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Disord+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Models of Infection Before and After Stroke: Investigating New Targets.</a> Infect Disord Drug Targets. 9, (2010).</li>
<li>Dirnagl, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bench+to+bedside%3A+the+quest+for+quality+in+experimental+stroke+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1465-1478 (2006).</li>
<li>Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Good+laboratory+practice%3A+preventing+introduction+of+bias+at+the+bench%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Good laboratory practice: preventing introduction of bias at the bench.</a> Stroke. 40, 50-52 (2009).</li>
<li>Group, S. T. A. I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+standards+regarding+preclinical+neuroprotective+and+restorative+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations for standards regarding preclinical neuroprotective and restorative drug development.</a> Stroke. 30, 2752-2758 (1999).</li>
</ol>

동물 실험 Landesamt fuer 아퍼 놀이 Soziales, 베를린, 독일에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

과도, 근위 MCA 폐색 18,19의 모델은 여기서 환자에서 허혈성 뇌졸중의 가장 일반적인 유형 중 하나를 모방한 것이었 제시. 변수 reperfusion 시간에 따라 20, 모델이 일시적 허혈성 발작 (TIA)에서 대형에 이르기까지 손상의 다른 등급을 제공합니다 허혈성 반구의 주요 부분을 포함 infarcts. 이것은 뇌졸중 후 연구자가 다른 pathophysiological 메커니즘을 공부하실 수 있습니다. 20,21 수술은 짧은 기간에 수행하고 높은 재현성 병변을 생성하실 수 있습니다. 그럼에도 불구하고,이 confounders의 철저한 관리가 필요합니다. 작업 기술 22 작은 차이가 경색에 다른 효과에 대한 계정 수 있습니다. 23,24을뿐만 아니라, 뇌성 혈관 해부학 차이로 인해 서로 다른 마우스 변종은 다른 결과를 보여줍니다. 25,26 바디케어 온도가 저체온증 더 심각한 적자에 작은 병변 27 고열로 이어지는으로 신경 손상에 영향을 미칩니다. 따라서 28 일, 온도 제어 및 유지 보수가이 모델에 관련성이있다., 혈압 및 혈액 가스는 또한 29 결과의 중요한 confounders하고 필요 모니터 수 있습니다. 신속하고 최소한의 침입 방법 중 30,31 사용 (비침습 적절한 혈압 측정, 쉬운 접근 혈액 수집 사이트)을 권장합니다. 일부 neuroprotective 효과를 가지고, 및 / 또는 vasodilators 수 있으므로 마취의 선택은 Isoflurane 예를 들어 같은, 또한 매우 중요합니다. 따라서 32, 마취에 대한 노출이 가능하고 표준처럼 짧게해야합니다. 우리는 더 이상보다 15 분 수술을받은 동물을 제외할 수 있습니다. 외과 사이트를 면도하는 것은 microabrasions과 염증을 생산하고 머리 조각을 출시. 이것은 더 이상 염증을 증가하고 뇌졸중 pathophysiology에 영향을 미치는 수 있습니다 현지 감염을 육성 수 있습니다. 주택 조건, 농축 특히 사용, 뇌졸중 결과에 영향을 미칠 수 있으며, 표준화 및 연구 보고서에서 설명한다. 재현성에 대한 환경 농축과 그 효과를 6,33,34 사용 논의의 문제입니다. 35 또 다른 중요한 confounder가 특히 ischaemia 36 이상 시간 이후에 감염 뇌졸중 유발 위험이있는 추가 병적 증가 죽음에 이르게한다. 37,38가 감염은 5 일 3시 경에에서 증상 해짐에 따라,이 같은 모델 후속 장기에 중요한 결과를했습니다. 뇌졸중, 표준화 및 품질 관리에 대한 새로운 치료 전략의 개발에 대한 검색 결과가 관련 생산 잠복기 translational 뇌졸중 연구 매우 중요하다 39 &quot;좋은 실험실 연습&quot;40,41 요구하는가. : <ol><li> 사용 동물의 적절한 자세한 설명; </li><li> 샘플 크기 계산과 예상 효과의 크기에보고; </li><li> 연구하기 전에 설정 포함하고 배제 기준; </li><li> 그룹으로 할당 임의화; </li><li> 조사에 관한 할당 은폐; </li><li> 분석에서 제외 동물을보고; </li><li> 결과 멀게 평가; </li><li> 관심과 연구 기금의 잠재적인 충돌을보고. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>외과용 가위 (피부 절개용)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 핀셋 2개 (Medical #5 straight tip)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위 (Vannas 타입)</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 클램프용 도포 핀셋</td><td>Fine Science Tools</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 혈관 클램프 (예: S&amp;amp;G B1-V)</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td>Serrefine 사용 가능</td></tr><tr><td>Hartmann 타입 지혈鉗 2개</td><td>Fine Science Tools</td><td>13002-10</td><td></td></tr><tr><td>지침 홀더 (Olsen-Hegar 또는 기타 타입)</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-14</td><td></td></tr><tr><td>표준 해부학적 핀셋 (상처 봉합용)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>5/0 봉합사</td><td>Suprama</td><td></td><td>혈관 결찰용</td></tr><tr><td>6/0 봉합사</td><td>Suprama</td><td></td><td>피부 봉합용, 5/0 사용 가능</td></tr><tr><td>리도카인 (예: Xylocain Gel 2%)</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>또는 기타 국소 통증 완화제</td></tr><tr><td>해부 현미경 (실체 현미경), 배율 6x ~ 최대 40x</td><td>Leica Zeiss</td><td>MZ6 Stemi2000C</td><td></td></tr><tr><td>냉광원</td><td>Leica Microsystems</td><td>KL1500</td><td></td></tr><tr><td>온도 피드백 제어 가열 패드 시스템</td><td>Fine Science Tools</td><td>21052-00</td><td>마우스 패드 및 소형 프로브 포함</td></tr><tr><td>이소플루란용 마취 시스템</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>Abott</td><td></td><td></td></tr><tr><td>수의용 회복 챔버</td><td>Peco Services</td><td>V1200</td><td>가열 케이지</td></tr><tr><td>8.0 나일론 필라멘트</td><td>Suprama</td><td>TEL181005</td><td>코팅용</td></tr><tr><td>메스</td><td></td><td></td><td>필라멘트를 조각내어 절단하는 용도</td></tr><tr><td>자</td><td></td><td></td><td>필라멘트를 정확한 길이로 절단하는 용도</td></tr><tr><td>Xantopren M Mucosa</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Activator Universal Plus</td><td>Heraeus Instruments</td><td></td><td>Optosil - Xantopren</td></tr><tr><td>Dumont 핀셋 2개 (Medical #5 straight tip)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-20</td><td></td></tr><tr><td>코팅되지 않은 필라멘트를 보관하고 잡기 위한 부드러운 하부 받침대</td><td></td><td></td><td>예: 면봉, 폼, &amp;#8230;</td></tr><tr><td>신규 제작 필라멘트용 용기</td><td></td><td></td><td>예: 페트리 접시, 유연한 폼, &amp;#8230;</td></tr></tbody></table>

마우스의 모델링 스트로크 - 필라멘트 모델 중간 대뇌 동맥 폐색

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

행정 죽음과 특히 고도로 발달한 국가에서 성인 장애의 가장 자주 원인 중 하나입니다. 그러나, 현재까지 치료 옵션이 매우 제한됩니다. 소설 치료 접근 방법의 필요성을 충족시키기 위해, 실험 연구는 뇌졸중 자주 초점 대뇌 ischaemia의 쥐 모델을 사용합니다. 대부분의 연구자들은 생쥐이나 쥐가 중간 대뇌 동맥 (MCA)의 영구 또는 과도 폐색을 사용합니다. intraluminal 봉합 기술 (때문에 필라멘트 또는 봉합 모델이라고도 함)를 통해 중간 대뇌 동맥 (MCA)의 근위 폐색은 아마 실험 뇌졸중 연구에 가장 자주 사용되는 모델입니다. intraluminal MCAO 모델은 비교적 비침습 방식으로 MCA 영역의 재현성 과도 또는 영구적인 ischaemia을 유도하는 장점을 제공합니다. Intraluminal 접근이 동맥의 전체 영토의 혈액 흐름을 방해. 필라멘트 폐색 따라서 체포은 기초 신경을 공급 lenticulo - 흔적 동맥에 근위 흐름. 필라멘트 피질과 striatum에서 재현할 병변의 MCA 결과의 폐색 및 영구 또는 일시적 중 하나가 될 수 있습니다. 반면, 말초 유도 모델 (lenticulo - 흔적 동맥 분기까지) MCA 폐색 일반적으로 striatum을 살려 주로 네크로 텍스 포함됩니다. 또한 이러한 모델은 craniectomy이 필요합니다. 이 문서에서 보여주는 모델에서 실리콘 코팅 필라멘트는 일반적으로 경동맥에 도입하고 중간 대뇌 동맥의 기원을 차단 윌리스의 서클에 내부 경동맥 따라 고급. 환자에서 중간 대뇌 동맥의 허혈성 뇌졸중 occlusions는 가장 일반적인 원인 중입니다. 다양한 허혈성 간격은 허혈성 병변이 심각도 다양한 것은 생산할 수와 reperfusion의 시점에 따라이 모델에서 자유롭게 선택할 수 있기 때문에. 부분적으로 인간의 thromboembolic 응고의 자연 또는 치료 (tPA) 용해 후 혈류의 복원 모델을 최소한 occluding 필라멘트의 제거에 의해 Reperfusion. 이 비디오에서 우리는 기본적인 기술뿐만 아니라이 모델의 예측 가치를 제한할 수있는 주요 함정과 confounders를 제공합니다.

중간 대뇌 동맥의 폐색 Filamentous은 생쥐에서 허혈성 뇌졸중 공부를위한 일반적인 모델입니다.

뇌졸중은 특히 선진국에서 사망 및 성인 장애의 가장 빈번한 원인 중 하나입니다. 하지만 현재까지의 치료 옵션은...

본 절차의 전반적인 목표는 관강 내 스레드로 중대뇌동맥을 차단하여 국소 뇌허혈 마우스 모델을 제작하는 것입니다. 이는 목 중앙을 절개하여 총경동맥을 시각화함으로써 수행됩니다. 다음 단계로 총경동맥 주변에 결찰사를 묶고, 외경동맥 클램프를 사용하여 이를 고정하고 출혈을 방지합니다.절차의 마지막 단계는 필라멘트를 윌리스 환(circle of Willis) 내로 삽입하는 것입니다. 이는 중대뇌동맥의 분지를 차단하여 최종적으로 신경학적 결손을 유발합니다. 그 결과, 행동 변화를 관찰함으로써 폐쇄 여부를 확인할 수 있습니다.필라멘트 기법을 통한 근위부 중대뇌동맥(MCA) 폐쇄의 주요 장점 중 하나는 선조체와 피질에서 재현성이 매우 높은 병변을 제공한다는 점입니다. 허혈은 영구적 또는 일시적으로 유도할 수 있으며, 또한 두개골 절제술이 필요하지 않으므로 필라멘트 기반의 MCA 폐쇄는 거의 비침습적인 방법으로 간주될 수 있습니다. 일반적으로 이 방법이 처음인 연구자들은 미세 수술 기법의 섬세한 특성으로 인해 어려움을 겪을 수 있습니다. 시술 전, 현미경 하에서 8.0 나일론 필라멘트를 11mm 길이로 잘라 필라멘트를 준비하십시오.필라멘트 팁의 8mm 길이를 실리콘 혼합물로 완전히 그리고 균일하게 코팅해야 하며, 최적의 결과를 위해 표준 작업 절차(SOP)를 사용할 것을 권장합니다. 사용하는 마우스의 종류는 연구 목적에 따라 달라집니다. 일반적으로 마우스는 10주령 이상이어야 합니다.수의진과 상의하여 적절한 마취제를 사용하십시오. 수술 중 가열판을 이용하여 마우스의 체온을 약 36.5 °C로 유지하고, 수술 부위를 준비하며, 피부와 주변 털을 소독한 후 건조시킵니다. 목을 따라 정중선 절개를 실시하고 연조직을 조심스럽게 벌립니다.미주신경이 손상되지 않도록 주변 신경과 분리하며 왼쪽 총경동맥을 조심스럽게 박리한 후, 5.0에서 7.0 봉합사로 결찰합니다. 다음으로 왼쪽 외경동맥을 분리하여 두 번째 매듭을 묶습니다. 왼쪽 내경동맥을 분리한 후 그 주변에 매듭을 느슨하게 묶습니다.6.0 필라멘트를 사용하여, 이후 절차에서 매듭을 조입니다. 왼쪽 내경동맥과 왼쪽 구개피판동맥이 잘 보이도록 확보한 후, 필라멘트 삽입을 준비하기 위해 두 동맥을 EC 클립으로 집습니다. 총경동맥이 분지되기 전 지점에 작은 구멍을 뚫습니다.앞서 준비한 모노필라멘트를 동맥 내부로 삽입합니다. 필라멘트를 내경동맥에 삽입하는 동안 클립으로 집어놓은 동맥들을 엽니다. 중간뇌동맥을 폐쇄하기 위해 내경동맥의 세 번째 매듭을 조입니다.필라멘트를 위치에 고정시킨 후, 통증 완화를 위해 상처 부위에 리도카인 겔을 국소 도포합니다. 가짜 수술(sham operation)의 경우, 필라멘트를 삽입한 후 즉시 제거하여 즉각적인 재관류가 일어나게 하고, 부피 보충을 위해 식염수 0.5 milliliters를 피하 주사합니다. 재관류의 효과를 연구하려면 세 번째 매듭을 풀고 필라멘트를 제거합니다.허혈 후 일정 시간이 경과한 시점이며, 보통 30분에서 60분 후입니다. 본 예시에서는 폐색 유도 60분 후에 재관류가 이루어지도록 하며, 생리식염수를 이용한 두 번째 부피 보충 주사를 투여합니다. 마지막으로 남은 봉합사를 짧게 조절하고 수술용 봉합사로 피부를 봉합합니다.동물을 가열된 케이지에 2시간 동안 두어 수술 후 회복하게 하고, 매일 동물의 불편함 징후가 있는지 확인하십시오. 수술 후에는 체중 감소가 발생할 수 있으므로, 섭취를 돕기 위해 페트리 접시에 으깬 먹이를 담아 바닥에 배치해 주어야 합니다.먹이는 7일 동안 매일 교체합니다. 혈류 제한 시간은 운동 및 행동 결손의 차이를 유발할 수 있습니다. 뇌허혈이 30분 또는 60분 지속된 후, 대부분의 동물은 저항성 감소를 보입니다.이후 운동 능력 장애로 인해 미는 동작과 원형 보행이 나타나며, 병변이 더 가벼운 경우에는 앞다리가 굴곡된 자세로 나타납니다. 이러한 쉽게 관찰 가능한 징후들은 수술 성공 여부를 판단하는 기본 점수로 활용될 수 있습니다. 결과적으로 발생한 병변은 조직학적 분석 또는 자기공명영상을 통해 평가할 수 있습니다.여기서 볼 수 있듯이, 중대뇌동맥을 60분 동안 폐쇄하면 선조체와 피질을 모두 포함하는 영역에 조직 전층 괴사가 발생하며, 30분 동안 허혈 상태를 유지하면 주로 선조체에 국한된 신경세포 사멸이 발생합니다. 숙련된 MCAO 수술자는 10분 이내에 이 기술을 습득할 수 있습니다. 이 절차를 수행할 때는 재현 가능한 결과를 보장하고 교란 변수를 제어하기 위해 표준 작업 절차를 준수하는 것이 중요합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

우리는 비디오 intraluminal monofilament를 사용하여 성인 마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색을 생산하는 방법을 보여줍니다. 또한 2,3,5 - triphenyltetrazolium 염화물 (TTC) 염색법에 의해 대뇌 경색의 범위를 평가하는 방법을 보여줍니다.

중간 대뇌 동맥 폐색의 마우스 모델

intraluminal 중간 대뇌 동맥 폐색 (MCAO) 모델은 실험 허혈성 뇌졸중 모델 중 가장 자주 사용되는 모델입니다. 여기서 우리는 전체 레이저 도플러 flowmetry의 가이드와 함께 상세하게 모델 및 대표 결과를 보여줄 것입니다.

마우스의 레이저 도플러 Flowmetry 안내와 허혈성 뇌졸중에 대한 중간 대뇌 동맥 Intraluminal 폐색 (MCAO) 모델

이 비디오는 실리콘 코팅된 필라멘트 기반 중대뇌동맥 폐색을 사용하여 쥐 모델에서 일시적인 뇌졸중을 발생시키는 절차를 설명합니다. 개발된 모델은 인간의 뇌졸중을 모방하여 뇌졸중 치료를 위한 새로운 치료 전략을 조사하는 데 도움이 됩니다.

필라멘트 삽입 기반 일시적 뇌졸중 모델: 쥐뇌에서 중대뇌동맥 폐색을 수행하기 위한 수술 절차

중대 뇌동맥 폐색 (MCAO)의 다양한 쥐 모델은 널리 실험 뇌 연구에 사용됩니다. 여기서 우리는 인간의 허혈성 뇌졸중의 대다수에 의해 부과 된 손상에 해당하는 크기의 일관성있는 대뇌 피질의 경색을 생산 두개 영구 원심 MCAO의 모델을 보여줍니다.

마우스의 모델링 스트로크 : 말초 중간 대뇌 동맥의 영구 응고

뇌졸중의 병태 생리를 이해하기 위해, 신뢰할 수있는 모델을 사용하는 것이 중요하다. 마우스에서 가장 자주 사용되는 뇌졸중 모델 중 하나를 설명한다 본 논문의 중간대 뇌동맥 폐색 (MCAO) 모델이라 재관류 (또한 관내 또는 필라멘트 봉합사 모델 지칭).

마우스의 중간 대뇌 동맥 폐색 및 재관류 유도 스트로크에 대한 수술 적 접근

뇌졸중은 최소한의 치료 옵션과 잃어버린 뇌 조직을 재생하기위한 현재 임상 치료와 글로벌 문제입니다. 여기에서 우리는 설치류의 모터 피질에 정확한 광혈전 뇌졸중을 만들고 뇌졸중 후 조직 재생에 미치는 영향을 연구하기 위해 하이드로 겔 생체 재료의 후속 주입을 만드는 방법을 설명합니다.

하이드로겔 생체 재료 비계의 주입 뇌졸중 후 뇌에

중간 대뇌 동맥 폐색의 다른 모델 (MCAo) 실험 적인 뇌졸중 연구에 사용 됩니다. 여기서, 외부 경동맥(ECA)을 통한 과도 MCAo의 실험적인 뇌졸중 모델이 기술되며, 이는 자발적인 혈전 용해 또는 치료로 인해 뇌혈관 혈전이 제거되는 인간의 뇌졸중을 모방하는 것을 목표로 한다.

마우스에서 뇌졸중 모델링: 외부 경동맥을 통한 일시적인 중간 뇌동맥 폐색

이 프로토콜은 중간 크기의 경색과 우수한 생존율을 가진 독특한 마우스 스트로크 모델을 보여줍니다. 이 모델을 통해 전임상 뇌졸중 연구자는 허혈 기간을 연장하고, 노령 마우스를 사용하고, 장기적인 기능적 결과를 평가할 수 있습니다.

늙은 쥐의 뇌졸중 결과를 연구하기 위해 수정된 경두개 중뇌동맥 폐색 모델

이 프로토콜은 중뇌동맥의 내강 내 폐색을 통한 마우스의 일시적인 국소 대뇌 허혈 모델을 설명합니다. 또한 자기 공명 영상 및 행동 테스트를 사용하여 결과 평가의 예를 보여줍니다.

뇌졸중의 일시적인 중뇌동맥 폐색 모델

이 프로토콜은 총경동맥을 통한 중뇌동맥 폐색 재관류를 준비하는 과정을 설명합니다.

중뇌동맥 폐색 재관류를 위한 수정된 모델 준비

학습하세요 마우스 뇌경색 모델링을 위한 중대뇌동맥 폐색술로, 필라멘트를 이용한 최소침습적 기법입니다. 이 방법은 허혈성 뇌졸중의 신경학적 결손을 연구하는 데 필수적인 도구를 제공합니다.

마우스의 모델링 스트로크 - 필라멘트 모델 중간 대뇌 동맥 폐색

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