미생물-벌레 상호작용을 연구하기 위한 고처리량 형광 분석법

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미생물학

0 조회수 • 2:45 분 • November 28th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

C . elegans 벌레가 들어있는 관부터 시작하세요.

벌레를 대조군 박테리아 또는 시험 박테리아가 포함된 영양분이 풍부한 아가로스 배지를 포함한 멀티웰 플레이트로 옮깁니다.

부화 기간 동안 벌레는 박테리아를 섭취하고, 이 박테리아는 장 상피에 정착하여 영양 공급원 역할을 하는 아미노산을 방출합니다. 이 아미노산들은 아미노산 유도체로 대사되어 리소좀 관련 장 과립에 저장됩니다.

다음으로 신선한 버퍼를 추가하고 웜을 검은색 멀티웰 분석판으로 옮깁니다.

각 웰에 화학 응력 유도제를 추가하고 플레이트를 밀봉하세요.

플레이트를 형광판 리더기에 넣고 형광 현상을 기록하세요.

벌레에서는 스트레스 유발제가 산화 스트레스를 유발하여 장 상피 세포를 손상시킵니다.

이로 인해 리소좀 관련 장 과립이 터져 아미노산 유도체가 방출되고, 자외선에 노출되면 파란색 형광을 띱니다.

대조군에 노출된 벌레의 형광을 비교하고, 박테리아의 집락화 효율과 숙주의 산화 스트레스 반응에 미치는 영향을 평가합니다.

15밀리리터 원뿔형 튜브 안에서 벌레 농도를 마이크로리터당 15마리로 조절하세요. 그 후 다중 채널 피펫 또는 반복 피펫을 사용해 8개의 96웰 NGM 아가로스 플레이트 각 웰에 8마이크로리터의 웜 용액을 이송합니다.

36시간 후, 96웰 플레이트의 각 웰에 30마이크로리터의 M9를 투여합니다. 다음으로, 저 고정 팁을 사용해 세트 레이아웃에 따라 384웰 플레이트에 웜을 옮겨 플레이트 리더가 적절히 설치되도록 합니다. 그 후 384웰 플레이트에 M9를 추가하여 최종 부피 60마이크로리터를 목표로 열응력 분석용 M9 40마이크로리터, TBHP 유도 산화 스트레스를 위한 6마이크로리터 TBHP 중 34마이크로리터 M9를 추가합니다.

그 후 TBHP 추가한 지 2분 이내에 분석을 시작하세요. 다음으로, 투명한 뚜껑으로 플레이트를 닫고, 384웰 플레이트의 가장자리를 마스킹 테이프로 밀봉하여 테이프가 뚜껑 위나 플레이트 아래로 닿지 않도록 합니다. 그 다음 플레이트를 플레이트 리더기에 넣으세요.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026