박테리아 세포를 이용한 마이크로플루이딕 플레이트 준비

마이크로플루이딕 플레이트를 생각하자. 이 두 개의 입출력 우물이 마이크로플루이딕 채널(서펜타인 채널과 실험 채널을 포함)로 연결되어 있다.

채널을 프라이밍하려면 출력에 미디어를 잘 추가하세요.

플레이트를 플레이트 스테이지에 넣고 멸균된 덮개로 밀봉하세요.

출력 웰에서 입력 웰로 미디어 흐름을 활성화하여 채널 내에 갇힌 공기 주머니를 씻어내세요.

플레이트를 제거하세요. 출력 우물에서 잔류 배지를 버리고 박테리아 배양물을 추가하세요.

입력 우물에 신선한 매체를 넣어 공기 역류를 방지하세요. 접시를 무대 위에 다시 놓아.

현미경으로 관찰하는 동안 세포를 실험 채널로 끌어들이기 위해 흐름을 재개하세요.

세포가 뱀 모양 채널로 침투하지 않도록 유량을 조절하여 막힘을 방지하세요.

흐름을 멈추고 박테리아 부착을 촉진하기 위해 배양하세요.

플레이트를 제거하고 잔류 박테리아 배양액과 배지를 버리세요.

마이크로유체 판 내 박테리아들은 이제 추가 실험을 위해 준비가 되었다.

프라이밍을 위해서는 먼저 48웰 마이크로플루딕 플레이트를 포장지에서 꺼내고, 플레이트 하단의 유리 표면에 닿지 않고 제거하고, 플레이트 하단의 유리 슬라이드를 렌즈 티슈로 닦습니다. 마이크로플루이딕 채널을 프라이밍하기 위해, 37도 최소 배지 200마이크로리터를 출혈 우물에 피펫 주입하되, 기포를 피하도록 주의하세요. 그 다음 플레이트를 플레이트 스테이지 위에 올려놓습니다.

에탄올이 마르면 에탄올로 인터페이스를 닦고, 플레이트 스테이지에 밀봉하세요. 제어 모듈의 수동 모드에서는 유체를 루리아-베르타니 육수로 37도에 설정하고, 최대 시어를 제곱센티미터당 다인 5개로 설정하세요. 출력 우물을 클릭하면 출력에서 입력 우물로 흐름을 활성화하고 채널을 프라이밍하세요.

5분 후에는 시딩 준비를 위해 흐름을 멈추고, 조심스럽게 접시를 스테이지에서 분리하세요. 그 후, 미세유체 채널로 이어지는 내부 원에서 매질을 제거하지 않고 출력 우물에서 잔류 매질을 흡입합니다. 실험 채널에 씨앗을 뿌리기 위해서는 최소 배지 300마이크로리터를 입력 우물에 추가한 뒤, 300 마이크로리터의 박테리아 배양물을 출력 우물에 추가합니다.

플레이트를 다시 영상 단계로 돌아가 접시한 뒤, 반드시 에탄올로 인터페이스를 닦아내고 한 채널에 집중하세요. 실시간 피드를 시각적으로 모니터링하는 동안, 약 2초간 1에서 2 다이네 /제곱센티미터 속도로 흐름을 재개하여 세포가 실험 채널에 들어갈 수 있도록 하고, 세르펜타인 채널에는 들어가지 않도록 하고, 플레이트를 온도 조절 스테이지에 1시간 동안 두어 세포가 부착할 수 있도록 합니다. 부착 기간이 끝나면 플레이트를 조심스럽게 스테이지에서 분리하고, 채널을 방해하지 않고 배출 우물에서 박테리아를 흡인하세요.

그 후 새 피펫 팁을 사용해 입력 웰에서 매체를 제거하세요.