셀룰로오스 생성 박테리아로부터 나노셀룰로오스 펠리클 제조

만니톨이 포함된 영양 배지를 채운 마이크로플레이트를 준비하세요.

각 우물에 셀룰로오스를 생성하는 박테리아를 접종하고 정적인 조건에서 배양하세요.

배양 기간 동안 박테리아는 만니톨을 흡수하여 포도당으로 대사합니다.

이 포도당은 박테리아 막에 내장된 셀룰로오스 합성효소 복합체로 운반되어 글루칸 사슬로 중합됩니다.

이 사슬들은 세포외 공간으로 돌출되어 미세섬유로 결정화됩니다.

미세섬유는 리본 형태의 구조로 뭉쳐 3차원 나노셀룰로오스 매트릭스를 형성합니다.

더 많은 나노셀룰로오스가 생성되면, 공기-액체 경계면에 축적되어 젤라틴 펠리클로 점축되어 우물 모양에 맞게 형성됩니다.

펠리클을 수확하여 알칼리성 용액에 배양하여 박테리아 세포를 용해한 후 잔류 배지를 제거합니다.

남은 알칼리성 용액을 제거하기 위해 펠리클을 물로 반복해서 헹구세요. 탈수를 막기 위해 펠리클을 물에 보관하세요. 그 후 증기 멸균하여 추가 적용을 위해 멸균을 보장합니다.

24웰 조직 배양판의 각 웰에 2밀리리터의 액체 배양지를 옮깁니다. 접종된 페트리 접시에서 두 개의 군락을 접종 바늘로 떼어 조직 배양 배양판의 첫 번째 웰에 넣습니다. 남은 23개의 우물에 대해 같은 절차를 반복합니다.

조직 배양 플레이트를 섭씨 30도에서 7일간 배양합니다. 이로 인해 직경 16mm, 두께 약 2에서 3mm의 총 24개의 BNC 펠리클이 생성됩니다. 성장 배지에서 BNC 펠리클을 채취하여 1% 수산화나트륨 용액 200밀리리터에 50도 섭씨에서 1시간 동안 멸균하여 G. xylinus의 모든 흔적을 제거합니다.

용액을 버리고 갓 준비한 1% 수산화나트륨 용액 200밀리리터를 추가하세요. 같은 과정을 한 번 더 반복하거나 용액 내 BNC 펠리클이 반투명한 모습을 얻을 때까지 반복합니다. BNC 펠리클을 물로 세 번 헹구고, 고순도의 물에 실온에서 보관하세요.

BNC 펠리클이 완전히 물에 잠기고 절대 건조되지 않도록 하세요. 그 다음 BNC 펠리클을 121도 섭씨에서 20분간 오토클레이브합니다.