환경 샘플에서 식물성 세포의 표적 용해를 통한 내포자 분리

0 조회수4:11 • November 28th, 2025

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내포자 형성 박테리아의 영양 세포와 내포자가 포함된 환경 샘플, 그리고 다른 박테리아를 채취합니다.

내포자는 악한 환경에서 생존할 수 있도록 보호막을 가지고 있습니다.

진공 여과 장치를 사용하여 세포와 내포자를 막에 가두도록 샘플을 필터링합니다.

멤브레인을 접시에 넣고 작은 조각으로 잘라주세요.

조각들을 튜브에 옮기고 완충제를 넣은 뒤, 튜브를 흔들어 세포와 내포자를 방출합니다.

고온에서 교반하여 영양 세포 구조를 약화시키면서도 내포자를 해치지 않습니다.

샘플을 식힌 후 라이소자임을 추가한 뒤 교반하며 배양합니다. 라이소자임은 영양세포의 세포벽을 파괴하여 세포를 파열시킵니다.

수산화나트륨과 세제를 첨가한 후, 세포 고분자와 이물질을 손상시키면서 회복력 있는 내포자를 보존하도록 배양합니다.

시료를 걸러내어 내포자를 분리하세요. 과도한 시약을 제거하기 위해 내포자를 세척하고, 추가 분석을 위해 준비하세요.

여과 장치와 진공 펌프가 텍스트 프로토콜에 따라 준비되면, 에탄올 불꽃으로 멸균된 겸자를 사용해 여과 장치에 멸균 니트로셀룰로오스 막을 추가합니다. 막 준비한 상정액 샘플의 절반을 멤브레인 여과 장치에 넣고 진공 펌프를 사용해 멤브레인의 세포를 수집합니다. 액체가 필터를 완전히 통과하면 진공 펌프를 멈추세요.

멸균된 겸자를 사용해 막을 조심스럽게 제거하고 멸균 페트리 접시에 넣으세요. 새 멸균막 조각을 사용해 남은 용액의 절반으로 여과를 반복하세요. 방금 채집한 생체물질 내 식물성 세포에서 내포자를 분리하고, 막이 얼어붙어 있다면 해동한 뒤, 에탄올 불꽃으로 살균된 가위로 더 작은 조각으로 자르세요.

막 조각을 멸균 2밀리리터 튜브에 옮기고 1X TE 완충제를 900마이크로리터 첨가합니다. 소용돌이 작용을 통해 완전히 혼합하여 막에서 생체량을 방출합니다. 튜브를 65도 섭씨, 80RPM에서 10분간 배양하세요.

그 후 인큐베이터에서 튜브를 꺼내 15분간 식히세요. 신선하게 준비한 라이소자임 100마이크로리터를 최종 농도인 밀리리터당 2밀리그램에 첨가하고, 37도 섭씨, 80RPM에서 60분간 배양하여 식물 세포를 용해합니다. 용해가 완료된 후에는 샘플에 3개의 정상 수산화나트륨 250 마이크로리터와 6% SDS 용액 250 마이크로리터를 첨가합니다. 상온에서 80RPM에서 60분간 배양하세요.

다음으로, 25밀리미터 직경의 막을 오토클레이빙으로 고정하는 무균 여과 장치를 준비합니다. 여과 장치가 식은 후에는 지름 25mm, 0.2마이크로미터 니트로셀룰로오스 막을 덮습니다.

샘플을 막에 넣고 진공 펌프를 사용해 액체를 걸러내어 막에 붙은 내포자를 포착하고, 식물성 세포 물질이 통과합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026