0 조회수 • 2:48 분 • November 28th, 2025
가닥 치위 DNA 중합효소, 뉴클레오타이드, 그리고 루프 매개 등온 증폭(LAMP)을 위한 이중 가닥 DNA 결합 염료가 포함된 마스터 믹스를 생각해 보십시오.
표적 박테리아 유전자에 특이적인 역상보서열을 포함하는 프라이머를 추가하세요.
마스터 믹스를 튜브에 분배하세요.
박테리아 DNA 템플릿이 포함된 샘플을 튜브에 추가하세요.
튜브를 LAMP 기기 안에 넣으세요.
초기 변성은 프라이머가 표적 DNA에 결합하도록 합니다.
가닥을 치환하는 DNA 중합효소가 새로운 가닥을 합성하기 시작하면, 기존 가닥을 대체하여 열 순환이 필요 없게 됩니다.
증폭된 곱은 역상보 쌍으로 인해 루프 구조를 형성합니다.
이 구조는 다음 사이클을 위한 여러 시작 부위를 포함하여 표적 DNA의 기하급수적 증폭을 용이하게 합니다.
염료는 증폭된 DNA에 결합하여 형광을 방출합니다.
샘플 내 표적 박테리아 유전자의 존재를 감지하기 위해 형광을 실시간으로 모니터링합니다.
LAMP 마스터 믹스 준비와 DNA 템플릿 추가에 사용되는 구역을 물리적으로 분리하세요.
작업면을 이소프로판올과 DNA 및 DNase 분해 용액으로 청소하세요. 그 다음, 피펫과 튜브 스트립 홀더를 청소하세요. 등온 마스터 믹스, 10X 프라이머 믹스, 분자급 물, 양성 대조 DNA, DNA 템플릿을 실온에서 해동하세요.
LAMP 계측기를 켜고 관련 샘플 정보를 입력하세요. 원고 지침에 따라 LAMP 마스터 믹스를 준비하고, 소용돌이 후 잠시 원심분리한 뒤, 튜브 스트립의 각 웰에 23마이크로리터의 마스터 믹스를 분배합니다. 모든 DNA 템플릿을 소용돌이로 돌려서 잠깐 원심분리하세요.
그 다음 적절한 우물에 DNA 템플릿 2마이크로리터를 넣고 뚜껑을 단단히 막습니다. 튜브 스트립을 홀더에서 분리한 뒤, 모든 시약이 튜브 바닥에 고였는지 확인하기 위해 튕기세요. 튜브 스트립을 LAMP 계측기에 넣고 LAMP 런을 시작하세요.
LAMP 반응이 진행되는 동안, 온도, 증폭, 어닐 탭을 탭하여 LAMP 실행 중 다양한 매개변수의 동적 변화를 확인할 수 있습니다.