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미생물학
0 조회수 • 2:38 분 • November 28th, 2025
먼저 큐벳을 온도 조절 큐벳 홀더와 교반기가 장착된 형광 분광광도계에 넣는 것부터 시작하세요.
중간 정도의 산성 pH에서 미리 가열된 버퍼를 추가하고, 홀더 온도를 스트레스 조건을 시뮬레이션하도록 설정하세요.
시험 샘플에는 대장균에서 추출한 산 보호 샤페론을 첨가합니다.
대조군 샘플에는 같은 양의 버퍼를 추가하세요.
다음으로, 두 샘플 모두에 온도와 산에 민감한 기질 단백질을 주입합니다.
빛 산란 모니터링을 시작하세요.
시료를 스트레스 조건에서 배양하여 기판 펼침을 유도합니다.
중간 정도의 산성 pH에서 샤페론이 활성화되어 접히지 않은 단백질을 안정화시킵니다.
pH 중화 소금 용액을 추가하고 빛 산란을 계속 기록하세요.
대조군 샘플에서는 중성 pH로 돌아오면서 접히지 않은 단백질이 응집하여 빛 산란이 증가합니다.
시험 샘플에서 샤페론은 기판 재접기를 촉진하여 대조군에 비해 빛 산란이 줄어듭니다.
빛 산란 신호를 비교하여 샤페론 활동을 평가합니다.
1밀리리터 석영 큐벳을 온도 제어 샘플 홀더와 교반기가 장착된 형광 분광광도계에 넣습니다.
여기 및 방출 파장을 350나노미터로 설정하세요. 원하는 pH 값에서 미리 가열된 버퍼 D를 큐벳에 적정 양으로 추가하세요. 총 부피는 1,000 마이크로리터입니다.
큐벳 홀더의 온도를 43도로 설정하세요. 버퍼에 12.5 마이크로몰 HdeB를 추가한 뒤, 0.5 마이크로몰 MDH를 추가합니다. 빛 산란 모니터링을 시작하세요.
반응을 360초 동안 배양하여 MDH가 충분히 펼쳐질 수 있도록 합니다. 0.16에서 0.34 부피의 2몰 비완충 이칼륨 인산을 추가하여 pH를 7로 올리고, 빛 산란을 440초 더 기록합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 데이터를 분석하세요.