합성 구강 박테리아 군집을 소화의 시뮬레이션 단계에 노출시키기

먼저 인간 입에서 흔히 발견되는 합성 박테리아 군집이 담긴 튜브부터 시작하세요.

점액, 당단백질, 효소 α-아밀라제를 포함한 모의 침액을 넣어 구강 환경을 모방한 후 흔들면서 배양합니다.

박테리아는 점액과 상호작용하여 응집을 촉진하고, α-아밀라아제는 타액의 효소적 조건을 복제합니다.

샘플을 채취하세요.

다음으로, 위장 환경을 모방하기 위해 산성 pH에서 뮤신이 포함된 위액을 모방하고, 흔들면서 배양합니다.

산성 환경은 산에 민감한 박테리아 종을 죽이지만, 산에 내성적이고 점액 코팅이 된, 약간 산에 내성하는 박테리아 종은 살아남습니다.

또 다른 샘플을 채취해.

마지막으로, 중탄산염과 생리적 염분이 포함된 모의 장액을 추가합니다. 흔들면서 부양하세요.

염분이 풍부한 환경은 이온 스트레스를 유발하여 박테리아 막을 파괴하고 생존 능력을 저하시킵니다.

최종 샘플을 채취하세요.

세 가지 시뮬레이션 후 샘플 모두 이제 박테리아 생존 가능성 평가를 위해 준비가 완료되었습니다.

구강 소화를 시뮬레이션하기 위해 50밀리리터 멸균관에 박테리아 군집 3밀리리터를 옮기고, 3밀리리터의 모의 타액액(SSF)과 혼합합니다.

인간 타액 9A형에서 추출한 알파-아밀라아제를 밀리터당 75유닛, 돼지의 위장 2형에서 추출한 뮤신 2리터당 2를 추가합니다. 혼합물을 37도 섭씨, 100RPM에서 2분간 배양하세요. DNA 추출 및 유동 세포분석 정량을 위해 2밀리리터 샘플을 채취합니다.

위 소화를 시뮬레이션하기 위액 3밀리리터에 4밀리리터의 위액(SGF)을 첨가합니다. 필요하다면 1몰 HCl로 pH를 3으로 조절하세요. 샘플을 섭씨 37도, RPM 100분에서 2분간 배양합니다.

그 다음 2밀리리터 샘플을 채취하세요. 소장 소화를 위해서는 박테리아에 4밀리리터의 모의 장액(SIF)을 첨가하세요. 필요하다면 수산화나트륨을 사용해 pH를 조절하세요.

그 후 샘플을 섭씨 37도, RPM 100rpm에서 2분간 배양한 후 2밀리리터 샘플을 채취합니다.