병원성 박테리아에 감염된 식물 잎 조직에서 유전체 DNA 추출

병원성 박테리아인 Candidatus liberibacter 에 감염된 잎을 예로 들어보세요.

조각으로 잘라 액체 질소에 급속 냉동한 뒤 분쇄하여 식물 세포를 파열시키고 박테리아를 포함한 내용물을 방출합니다.

핵 용해 완충제를 추가하고 완전히 섞으세요.

고온에서 배양하여 세포막을 용해하여 식물 핵과 박테리아 세포에서 유전체 DNA를 방출합니다.

RNase 효소를 추가하고, 튜브를 뒤집어 혼합한 뒤 RNA를 분해하기 위해 배양합니다.

단백질 침전액을 추가하고 혼합하여 단백질 응집을 촉진합니다. 원심분리기에서 펠릿 단백질과 세포 이물질로 변환하는 것.

상청액을 이소프로판올이 들어있는 튜브로 옮겨 섞어 DNA를 가시에 보이는 가닥으로 침전시킵니다. 원심분리기로 DNA를 펠릿 처리합니다.

불순물을 제거하기 위해 에탄올로 펠릿을 세척하고, 자연 건조 후 DNA를 다시 수화하세요.

DNA를 고온에서 용해시키기 위해 배양한 후, 샘플을 마이크로큐벳에 적재합니다.

분광광도계를 사용해 분리된 DNA 농도를 측정합니다.

먼저, 깨끗한 가위로 감귤나무에서 신선한 잎을 통째로 잘라내어 깨끗한 비닐 샌드위치 봉지에 넣으세요. 그 다음, 절구와 절구에 액체 질소를 소량 첨가해 냉각합니다. 다음으로, 가위로 잎 조직의 약 1평방인치 크기의 작은 조각을 잘라냅니다.

잎 조각을 절구에 넣어 즉시 얼리세요. 빠르게 모르타르로 잎 조직을 갈기 시작해 액체 질소가 증발할 때까지 하고, 미세한 녹색 가루가 남습니다. 다음으로, 금속 주걱을 액체 질소에 10초에서 15초 정도 식힙니다. 그 다음 차가운 주걱으로 1.5밀리리터 마이크로 원심분리관에 담긴 모르타르의 분쇄 조직을 퍼냅니다.

1000마이크로리터 피펫을 사용해 600마이크로리터의 핵 용해액을 샘플에 첨가하세요. 그 후 샘플을 1초에서 3초 동안 소용돌이로 만듭니다. 튜브를 섭씨 65도에서 15분간 물욕에 넣어 부화시킵니다.

배양 기간이 끝나면 10마이크로리터 피펫을 사용해 용해액에 RNase 용액 3마이크로리터를 첨가하여 RNA를 제거합니다. 그 다음, 튜브 안의 내용을 두다섯 번 뒤집어 섞습니다.

캐비닛 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 15분간 배양하세요. 15분 후, 샘플에 200마이크로리터의 단백질 침전액을 추가합니다. 고속으로 20초 동안 튜브를 소용돌이로 돌려. 다음으로 샘플을 13000g에서 3분간 원심분리합니다.

원심분리 과정 중에는 실온에서 유지된 600마이크로리터의 이소프로판올을 새로운 1.5밀리리터 마