단일 콜로니 선택을 통한 스트레스 적응 박테리아의 분리

오랜 기간 스트레스 상태에서 배양된 박테리아 배양물을 예로 들어보겠습니다.

장기적인 스트레스는 자발적 돌연변이, 자연선택, 스트레스 적응 박테리아의 증식을 초래합니다.

이 박테리아들을 분리하기 위해, 동일한 스트레스 요인이 포함된 한천 플레이트에 소량의 배양물을 배양하고 배양합니다.

스트레스 요인은 스트레스에 적응한 박테리아 집락만을 성장시킵니다.

유전적 순수를 유지하기 위해 단일 군락을 선택하고, 액체 배지에 스트레스 물질을 접종하세요.

스트레스에 적응한 박테리아의 성장을 촉진하기 위해 흔들면서 배양하세요.

소량의 배양물을 사용해 신선한 배지에 스트레스 물질을 접종하세요.

동시에 스트레스 요인이 포함된 다른 배지에 야생형 또는 스트레스에 적응하지 않은 박테리아를 접종합니다.

박테리아 성장의 지표로 정기적으로 흡수도를 측정하세요.

성장 프로필을 비교하여 스트레스에 적응한 박테리아의 성공적인 분리를 보장하세요.

동일한 스트레스 요인을 함유하고 같은 농도의 한천 플레이트 배지를 준비합니다. 케모스터에서 배출 배양액 0.1밀리리터를 플레이트하고 37도 섭씨에서 16시간 배양합니다. 배양 후에는 멸균 이쑤시개로 플레이트에서 단일 콜로니를 골라내어 케모스타트와 같은 스트레스 요인과 중간 농도의 15밀리리터 시험관에 접종합니다.

6시간 동안 부양하세요. 배양 육수 1밀리리터를 250밀리리터 에를렌마이어 플라스크에 50밀리리터 배양액이 들어 있는 플라스크에 옮깁니다. 매시간 0.5밀리리터의 배양 육수를 수확하고 600나노미터에서 광학 밀도를 측정합니다.

스트레스 요인이 있을 때 적응된 균주와 야생형 균주의 성장 속도를 비교해 보세요