오염물질 분해 균주를 분리하기 위한 해양 박테리아 선별

0 조회수4:04 • November 28th, 2025

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환경 오염물질을 분해하는 박테리아를 포함한 다양한 미생물이 포함된 바닷물 샘플을 취득합니다.

샘플을 연속적으로 희석하여 미생물 밀도를 줄인 후 영양 배지에 판을 붙입니다.

인큐베이션 후, 형태학적으로 구분되는 집단을 선택하며, 이들은 유전적·대사적으로 다양한 박테리아 유형을 여전히 보유하고 있을 수 있습니다.

각 선택한 군집을 줄로 표시하여 개별 세포를 분산시키고 배양합니다.

각 세포는 유전적으로 순수한 박테리아 분리주를 대표하는 집락을 형성하며, 독특한 대사 프로필을 지닙니다.

각 분리물을 배양지에 접종하고 배양하여 바이오매스를 증가시키세요.

배양물을 원심분리하고 상원액을 버린 뒤, 잔류 매지를 제거하기 위해 완충제로 세척합니다.

세포를 완충기에 재현탁시키고, 환경 오염물질인 EE2가 포함된 선택 배지에 접종합니다.

배지 내 유일한 탄소원으로서 EE2는 에너지와 성장을 위해 대사할 수 있는 박테리아를 선택합니다.

배지 내 탁도는 박테리아 성장을 나타내며, 오염물질 분해 박테리아 분리균의 분리를 확인한다.

박테리아를 선별하기 위해, 산호 샘플의 경우 멸균 식염수 용액에서 최대 10에서 음의 9까지 연속 희석을 수행하고, 물 샘플의 경우 최대 10에서 음의 6까지 희석합니다. 피펫으로 다섯 번 희석한 후 팁을 버립니다.

그다음 각각을 소용돌이로 돌리세요. 다음 연속 희석을 하기 전에 매번 5초간 샘플을 소용돌이로 돌립니다. 3% 염화나트륨 용화성 육수, 한천 배지를 포함한 페트리 접시에 희석액 100마이크로리터를 피펫팅하여 플레이트를 부착합니다.

예를 들어 목표 온도인 26도 섭씨에서 1일에서 3일간 배양합니다. 하루에 한 번 번호판을 확인하세요. 새로운 판에서 뚜렷한 성장 형태를 보이는 집단을 선별하여 줄무늬판 기법을 사용합니다.

이 과정을 필요한 만큼 반복하여 순수한 군락이 플레이트에 자라도록 합니다. 원고에 설명된 대로 4도 섭씨 또는 글리세롤에 보관하세요. EE2 분해 능력 검사를 수행하려면, 신선한 플레이트에서 단일 콜로니를 골라 2밀리리터의 멸균 LB 배지를 튜브에 접종합니다.

글리세롤 스톡이라면, 글리세롤 박테리아 스톡 10마이크로리터를 LB 한천 플레이트에 스트레이크하세요. 24도에서 28도에서 하룻밤 사이 부화하면 단일 군체가 자라게 됩니다. LB 배지를 담은 튜브를 150g 속도에서 24도에서 28도 사이의 지속적인 교반 상태로 하룻밤 동안 놓습니다.

박테리아가 성장한 후, 8,000g 원심분리기로 8분간 실온에서 세포를 펠릿 처리합니다. 상원액은 버리세요. 남은 LB 육수를 씻으려면 세포를 다시 부유시키기 위해 2밀리리터의 식염수를 넣으세요.

세척을 두 번 반복하여 탄소 원천의 흔적이 전혀 없도록 하세요. 세척 및 재현탁된 세포는 EE2가 유일한 탄소원인 최소 부시넬 하스 배양 배지에 접종합니다. 600나노미터에서 광학 밀도를 이용한 박테리아 성장과 LB 한천 배지 내 군락 형성 단위를 16시간에서 72시간 배양 후 평가합니다.

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마지막 업데이트: 22 8월 2026