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미생물학
0 조회수 • 3:07 분 • November 28th, 2025
먼저 다양한 미생물 군집이 포함된 해수 샘플부터 시작하세요. 여기에는 탄화수소를 분해할 수 있는 박테리아도 포함됩니다.
미생물 밀도를 줄이기 위해 시료를 식염수에 연속적으로 희석합니다.
멸균된 증류수에 원유를 첨가하고 혼합물을 교반하여 오일의 탄화수소 성분을 부분적으로 용해시킵니다.
혼합물이 가라앉도록 두어 수용성 오일과 불용성 오일 분획으로 분리하세요.
각 오일 분획을 유일한 탄소원으로 사용하여 수용성 또는 소수성 탄화수소를 분해하는 박테리아를 농축하기 위해 선택적 한천 플레이트를 준비합니다.
희석된 해수 샘플을 선택적 배지 위에 배납하고 상온에서 배양합니다.
출현하는 집락은 하이드록실라아제와 디옥시게나아제 같은 효소에 의존해 탄화수소를 대사합니다.
형태학적으로 구별되는 군락을 골라 같은 오일 분획을 포함한 신선한 배지에 재줄기를 적용하여 순수한 탄화수소 분해 박테리아 배양물을 얻습니다.
이 방법은 기름을 분해하는 해양 박테리아를 선택적으로 분리할 수 있게 합니다.
유-수용성 분획과 유-물 불용성 분획을 유일한 탄소원으로 포함하는 최소 배지를 준비하려면, 바닥에 밸브가 있는 필터 플라스크에 멸균수 500밀리리터에 1-2% 원유를 첨가합니다. 플라스크를 24도에서 28도, 150배 g에서 48시간 동안 지속적으로 저어줍니다. 그 후 플라스크를 안정된 표면에 놓고 용해성 분획과 불용성 분획이 분리될 때까지 10분에서 20분간 기다립니다.
그 다음 하단 필터 플라스크를 열어 기름-물 용해성 분획을 새 멸균 플라스크로 옮기고, 기름-물 불용성 분획을 보존합니다. 그 다음 부시넬 하스 한천 최소 배지 두 병을 준비하세요. 오토클레이브하세요.
유물-수용성 분비와 결합하면 500밀리리터의 한천 배지를 만들 수 있습니다. 기름-물 불용성 분비도 마찬가지로 각 배지별로 약 25밀리리터씩 개별 페트리 접시에 옮깁니다. 오일 분해 박테리아를 분리하기 위해 이전에 희석한 샘플을 재사용하고, 각 희석액을 100마이크로리터씩 한천 배지를 포함한 페트리 접시에 피펫팅하여 배지에 부착합니다.
플레이트에 대한 음의 대조군을 꼭 보관하세요. 목표 온도에서 1일에서 3일간 배양한 후 이전과 같이 격리 과정을 반복하세요.