0 조회수 • 2:43 분 • November 28th, 2025
항세포자멸성 박테리아 단백질인 CaeB를 발현하는 인간 세포를 검사해 보세요.
CaeB가 없는 세포를 대조군으로 사용하세요.
조절자와 반응 플라스미드를 모두 포함하는 테트라사이클린 유도 유전자 발현 시스템과 복합체화된 트랜스펙션 시약을 도입합니다.
조절 플라스미드는 전사 활성화자와 침묵자를 암호화하는 반면, 반응 플라스미드는 TRE에 의해 조절되는 세포자사멸 촉진 단백질을 암호화합니다.
플라스미드 흡수와 단백질 조절 발현을 촉진하기 위해 세포를 배양합니다.
테트라사이클린이 없으면 활성제는 비활성 상태로 남아 있으며, 침묵제는 TRE에 의해 구동되는 전사를 억제합니다.
테트라사이클린 유사체를 추가하고 배큐하세요.
이 유사체는 활성화자-TRE 결합을 가능하게 하여 단백질 발현을 촉진합니다.
대조 세포에서는 이것이 세포자멸 신호를 유발하여 세포자멸 마커를 활성화합니다.
CaeB 발현 세포에서는 CaeB가 세포자사자 신호를 억제하여 마커 활성화를 감소시킵니다.
CaeB 발현 세포에서 마커 활성화가 감소한 것은 CaeB가 세포자사멸사를 억제함을 시사합니다.
이 절차를 시작하면 12웰 플레이트에 GFP 또는 GFP-CaeB를 안정적으로 발현하는 HEK293 세포를 100,000 세포 밀도로 시딩합니다.
다음으로, 75마이크로리터의 Opti-MEM 배지에서 DNA와 폴리에틸레니민 형질전환 시약을 각각 준비하고 상온에서 5분간 배양합니다. 복합 형성을 위해서는 두 혼합물을 상온에서 15분간 함께 배양하세요. 그 후 폴리에틸레니민 DNA 용액을 세포에 점차 첨가하고 37도 온도에서 5% 이산화탄소에 배큐합니다.
형질전환 5시간 후에는 배양액에 독시사이클린 1마이크로그램을 1밀리리터당 첨가하여 프로세포자사절단 단백질 발현을 유도합니다. 그 후 세포를 37도 섭씨에서 5% 이산화탄소에 18시간 배양합니다.
본 연구에서는 항세포사멸 박테리아 단백질인 CaeB가 인간 세포의 세포사멸을 조절하는 역할을 조사합니다. 테트라사이클린 유도성 유전자 발현 시스템을 이용하여, pro-apoptotic 신호 전달에 미치는 CaeB의 영향을 분석합니다.
유도성 유전자 발현 시스템을 통해 숙주-병원체 상호작용을 정밀하게 조사하고 초기 발견 단계에서 기전적 리스크를 제거할 수 있습니다. 이 접근 방식을 통해 바이오 제약 팀은 CaeB와 같은 박테리아 이펙터가 세포 사멸과 같은 핵심 신호 전달 경로를 어떻게 방해하는지 정확히 짚어낼 수 있습니다. 이러한 기전적 명확성은 예측 신뢰도를 높이며 발견 파이프라인 전반에 걸쳐 표적 검증 결정을 내리는 데 유용한 정보를 제공합니다.
이 유도성 시스템은 초기 발견과 리드 화합물 도출 단계의 접점에 통합되어, 가설 기반의 경로 조사와 스크리닝 캠페인을 위한 분석 준비를 지원합니다.
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마지막 업데이트: 22 8월 2026